MEDDAILY.INFO
медицинская энциклопедия
ГлавнаяКарта сайта Контакты
 

Оценка клеточного звена иммунитета

фото Оценка клеточного звена иммунитета
Успехи фундаментальной иммунологии, основанные на достижениях молекулярной биологии и генной инженерии, позволили уточнить иммунопатогенез аллергических, аутоиммунных, онкологических и инфекционных заболеваний. В то же время возросшие возможности проточной цитометрии расширили представления о необходимом перечне популяций лимфоцитов, исследование которых целесообразно при оценке клеточного звена иммунитета.

Процесс развития иммунного ответа организма на проникновение инфекции или какие-либо другие воздействия сопровождается значительными изменениями субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток. Это относится как к изменению абсолютного количества иммунокомпетентных клеток, их субпопуляций, так и к появлению на клеточной поверхности определенных функциональных молекул.


Под воздействием различных агентов клетки приспосабливаются и отвечают на это изменением экспрессии тех или иных мембранных и внутриклеточных маркеров. Таким образом, одним из эффективных механизмов иммунорегуляции является модуляция экспрессии функционально значимых молекул. Не менее важным является и изменение абсолютного количества иммунокомпетентных клеток в периферической крови.

Определение субпопуляционного состава, или фенотипа, лимфоцитов как одной из основных популяций иммунокомпетентных клеток в настоящее время является важным диагностическим признаком, позволяющим судить о течении процессов, происходящих в организме. Под фенотипом следует понимать совокупность функционально значимых маркеров, характерных для определенных стадий дифференцировки, пролиферации, активации или программируемой клеточной гибели (апоптоза).


Абсолютное и относительное количество клеток, имеющих тот или иной фенотип, является конечным результатом иммунофенотипирования.

Разработка современных цитометров, успехи в химии флюоресцентных красителей, открытие новых CD-маркеров, усовершенствование программного обеспечения позволили проводить анализ фенотипа иммунокомпетентных клеток как рутинную процедуру и получать наиболее полную и достоверную информацию. Это позволяет локализовать и отследить процессы, протекающие в организме, изучить их, а значит, адекватно на них реагировать. Как следствие, разрабатываются новые подходы к коррекции активности патологически измененных клеток и процессов, которые они определяют.

В течение последних 20 лет в практике клинико-диагностической лаборатории определение показателей, отражающих количественное содержание пяти основных популяций лимфоцитов в периферической крови (Т-клеток, Т-хелперов, цитотоксических Т-лимфоцитов, В-клеток и NK-клеток), проявило недостаточную их информативность. С другой стороны, интенсивное изучение патогенеза различных заболеваний выявило ключевую роль активированных лимфоцитов, регуляторных Т-клеток, субпопуляций В- и NK-клеток. В связи с этим для оценки иммунного статуса при иммунофенотипировании лимфоцитов наряду с основными пятью популяциями целесообразно расширить анализ за счет малых субпопуляций лимфоцитов и пулов активированных клеток. Технические и методические возможности для этого у практических лабораторий появились. Так, если ранее для определения цитотоксических Т-лимфоцитов считалось достаточным использовать только один маркер — CD8, согласно современным представлениям необходимо одновременное исследование четырех маркеров - CDS, CD4, CD3 и CD45. Реализация такого подхода возможна только при использовании многоцветового цитометрического анализа. Однако появление новых лабораторных показателей, их внедрение в рутинную практику требует стандартизации протокола определения показателей и значений нормы.

В-ЛИМФОЦИТЫ И ИХ СУБПОПУЛЯЦИИ
Популяцией лимфоцитов, отвечающей за продукцию антител, являются В-клетки. Каждый лимфоцит, относящийся к В-клеткам, запрограммирован на продукцию антител одной-единственной специфичности, и эти антитела присутствуют на его поверхности в качестве рецептора для соответствующего антигена. Один В-лимфоцит несет на своей поверхности примерно 105 идентичных молекул антител. Данные антитела называют поверхностными, или мембранными, иммуноглобулинами.

Основной формой мембранных иммуноглобулинов являются иммуноглобулины класса М (IgM). Они экспрессируются на мембране всех зрелых В-лимфоцитов, которые не имели контакта с антигеном. Однако на поверхности В-клеток, дифференцировка которых уже завершилась, присутствуют и иммуноглобулины класса D (IgD). В процессе формирования иммунного ответа происходит переключение изотипов мембранных иммуноглобулинов на IgG, IgA, IgE.

Кроме мембранных иммуноглобулинов, В-лимфоциты экспрессируют целый ряд мембранных маркеров, которые, во-первых, необходимы для формирования В-клеточного рецептора и играют важную роль в передаче сигнала в процессе распознавания антигена, во-вторых, являются маркерами линейной принадлежности В-клеток, что особенно полезно при идентификации данной популяции лимфоцитов. К таким маркерам прежде всего относятся CD19 и CD21. Данные молекулы формируют ко-рецепторный комплекс, в который вовлечен также и CD81. СD19-антиген, так же известный как В4, представляет собой мембранный гликопротеин с молекулярной массой 95 кДа. CD19 участвует в регулировании развития В-лимфоцитов, активации и их дифференцировке. Эта молекула экспрессируется на всех нормальных В-клетках, включая про-В-лимфоциты, но исчезает у плазматических клеток. Молекула CD19 отсутствует на мембране нормальных Т, NK-клеток, моноцитов и гранулоцитов. В связи с этим данный антиген рекоменду¬ют для количественной оценки общей популяции В-клеток.

CD21-антиген представляет собой трансмембранный гликопротеин с молекулярной массой 145 кДа. Он принадлежит к семейству белков, регулирующих активность комплемента. CD21 (CR2) является рецептором для Субкомпонента комплемента и вируса Эпштейна-Барр. Данный антиген присутствует на зрелых В-лимфоцитах и отсутствует на Т-лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах. Молекула CD21 вовлечена в активацию и пролиферацию В-лимфоцита. Кроме перечисленных выше структур, к пан-В-клеточным антигенам относят такие молекулы, как CD20 и CD22. СВ20-антиген (Вр35) является интегральным негликозилированным мембранным белком с четырьмя трансмембранными доменами. Существуют три изоформы CD20 в зависимости от молекулярной массы (33,35 и 37 кДа), которые являются результатом дифференцированного фосфорилирования внутри цитоплазматических доменов. Данная молекула является Са2+-каналом и участвует в активации и пролиферации В-клеток за счет регуляции трансмембранной проводимости ионов Са2+. Молекула CD20 присутствует на всех нормальных В-лимфоцитах периферической крови, лимфатических узлов, селезенки, миндалин и костного мозга, но отсутствует на плазматических клетках. Хотя CD20 первоначально был описан как В-клеточный линейный маркер, оказалось, что небольшая субпопуляция Т-клеток человека экспрессирует CD20 в низкой плотности, причем В-клетки экспрессировали CD20 в высокой плотности (CD20bright), а Т-клетки — в низкой (CD20dim) и составляли 2,4±1,5% лимфоцитов периферической крови. Хотя оценка экспрессии CD20 полезна при характеристике В-клеток, необходимо достаточно осторожно подходить к интерпретации получаемых результатов. Особенно это относится к случаям иммунофенотипирования клеток костного мозга. Сходная проблема может возникнуть при изучении клеток периферической крови у пациентов с ревматоидным артритом. Молекула CD20 является мишенью для терапии неходжкинских В-клеточных лимфом.

СD22-антиген (BL-CAM) — трансмембранный гликопротеин, принадлежащий к суперсемейству иммуноглобулинов. Данная молекула экспрессируется в виде двух изоформ: а-формы (130 кДа) и р-формы (140 кДа). СD22-антиген экспрессируется в цитоплазме В-клеточных предшественников и на поверхности зрелых В-лимфоцитов. Экспрессия CD22 исчезает после активации В-клеток предшествующей стадии созревания плазматической клетки. Молекула CD22 отсутствует на Т-лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах периферической крови. В настоящее время среди В-лимфоцитов выделяют три основные субпопуляции: В-1, В-2 и В-клетки памяти. Достаточно важная роль при данном делении отводится молекуле CD5.

Кроме роли, связанной с передачей сигналов при активации, молекула CD5 расценивается как возможный маркер В-лимфоцитов, позволяющий различать их субпопуляции: CD5+ В-клетки (В-1-клетки) и обычные CD5 В-клетки (В-2- клетки). В-1-клетки вызывают значительный интерес вследствие ассоциации с продукцией аутоантител, а также с аутоиммунной патологией. Значительная роль В-1-клеток была отмечена при ревматоидном артрите, системной красной волчанке и синдроме Шегрена. Увеличение количества CD5+ В-лимфоцитов наблюдали у пациентов, страдающих миастенией, инсулинозависимым диабетом и тиреоидитом Хашимото. В табл. 3-2 приведен список заболеваний, при которых определение относительного уровня В-1-лимфоцитов является диагностически значимым.

Следующей субпопуляцией В-лимфоцитов являются так называемые В-клетки памяти. Идентификация CD27 как маркера В-клеток памяти позволила надежно и эффективно идентифицировать в периферической крови нативные В-клетки (IgM+CD27) и В-клетки памяти (CD27+).

СD27-антиген представляет собой трансмембранный гликопротеин в виде гомодимера из двух мономеров с молекулярной массой 55 кДа, связанных дисульфидными мостиками. CD27 принадлежит к семейству генов-рецепторов фактора некроза опухоли. CD27 антиген найден на медуллярных тимоцитах, периферических Т-лимфоцитах, активированных В-лимфоцитах и NK-клетках. Его лигандом является молекула CD70. Взаимодействие CD27 с его лигандом CD70 на Т-клетках является одним из условий дифференцировки В-клеток в плазматические клетки. Отсутствие IgD CD27+ В-клеток памяти в значительной степени объясняет нарушение продукции иммуноглобулинов, несмотря на функциональную передачу сигналов молекулой CD40 у пациентов с Х-связанным гипер-синдромом.

Гуморальный иммунный ответ играет важную, а порой и критическую роль в устранении внутри- и внеклеточных патогенов. Этот процесс осуществляется за счет дифференцировки зрелых В-клеток в плазматические клетки, которые секретируют большие количества иммуноглобулинов. Однако большинство антигенов вызывают иммунную реакцию лишь при наличии и участии Т-лимфоцитов. Это относится к белковым и клеточным антигенам, а также к вирусам, которые объединяют в понятие «Т-зависимые антигены». Лишь небольшое количество антигенов способно вызывать иммунный ответ без участия Т-клеток. Некоторые бактериальные липополисахариды при достаточно высокой концентрации способны к поликлональной активации значительной части популяции В-лимфоцитов, т. е. для такой стимуляции антигенная специфичность роли не играет. Линейные антигены, медленно распадающиеся в организме и имеющие организованную определенным образом и часто повторяющуюся детерминанту (полисахарид пневмококков, полимеры D-аминокислот, поливинилпироллидон), также способны непосредственно стимулировать В-лимфоциты. Индуцируемый Т-независимыми антигенами иммунный ответ практически не сопровождается формированием клеток памяти. При иммунном ответе на Т-независимые антигены вырабатываются IgM и эффективность Т-независимого ответа во много раз ниже. В свою очередь, Т-зависимые антигены при отсутствии Т-клеток лишены иммуногенности. При ответе на эти антигены требуется подключение Т-лимфоцитов. Т-зависимые антигены обеспечивают и определяют кооперативное взаимодействие В- и Т-клеток, в результате чего происходит переключение синтеза с IgM на IgG.

Выделяют два пути образования различных фракций антител: Т-зависимый путь в герминальных центрах и Т-независимый путь вне герминальных центров. Точная функция второго пути и генерирование IgM+CD27+ В-клеток в настоящее время окончательно не выяснены. Однако IgM+CD27+ В-клеток играют важную роль в гуморальном ответе против Т-независимых патогенов, например инкапсулированные бактерии. Активация зрелых В-клеток с Т-зависимым антигеном приводит к образованию плазматических клеток двумя независимыми путями дифференцировки. Активированные В-клетки могут войти в экстрафолликулярные пролиферативные центры, где они быстро дифференцируются в короткоживущие плазматические клетки, секретирующие IgM. С другой стороны, активированные В-клетки могут попасть в герминальный центр, где происходят различные молекулярные перестройки: соматические гипермутации, переключение изотипов иммуноглобулинов и отбор высокоаффинных вариантов. Антигенселективные В-клетки герминального центра являются предшественниками двух типов клеток: высокоаффинных В-клеток памяти и долгоживущих плазматических клеток, которые отвечают за долгосрочную гуморальную устойчивость.

Помимо перечисленных молекул рецепторного и ко-рецепторного комплекса, на поверхности В-клеток экспрессируются антигены главного комплекса тканевой совместимости класса II (HLA-DR). Эти молекулы принимают участие в представлении антигенов, а В-клетки являются антигенпредставляющими клетками. Однако HLA-DR-антигены также представлены на активированных Т- и NK-клетках, что объясняется несовпадением относительного количества CD3 CD19+ В-клетки и CD3-HLA-DR-oeTKH при некоторых патологиях.

Оценка относительного количества В-клеток является одним из важных диагностических признаков. При воспалительных заболеваниях наблюдается значительное снижение количества В-клеток. Особенно ярко это выражено при остром панкреатите, хроническом пародонтите и тонзиллите, гнойном осложнении травм. Противоположный эффект наблюдается при острых и хронических формах гепатитов В и С.

Развитие и протекание иммунологических процессов в популяции В-клеток сопровождается количественными и качественными процессами. Активация В-клеток сопровождается изменением экспрессии антигенов CD80 и CD86. CDSO-антиген (В7, ВВ1) является высокогликозилированным одноцепочечным белком, его внеклеточная область состоит из двух иммуноглобулиноподобных доменов. Эта молекула имеет молекулярную массу 60 кДа, и лигандами для нее служат две структурно-подобные молекулы, экспрессируемые на Т-лимфоцитах, а именно CD28 и CD152 (CTLA-4). При активации В-лимфоцитов in vitro антиген CD80 экспрессируется после 24-часовой стимуляции и достигает максимального уровня к 48-72 ч. Данный антиген не экспрессируется на большинстве покоящихся В-клеток периферической крови, но определяется на отдельных субпопуляциях активированных В-клеток. Антиген CD80 также экспрессируется на HTLV-1 трансформированных Т-клетках и активированных моноцитах. Контакт CD80 с лигандами обеспечивает проведение ко-стимуляторных сигналов при активации Т-клеток.

СD36-аитиген (В7-2, В70) — также трансмембранный одноцепочечный гликопротеин, по своей структуре подобный CD80. Его молекулярная масса составляет 80 кДа. Внеклеточная область состоит из иммуноглобулиноподобных доменов: одного V-типа и одного С-типа, на которых находятся 8 потенциальных сайтов для N-гликозилирования.

Цитоплазматический конец CD86 имеет 3 участка для фосфорилирования протеинкиназой С. CD86 взаимодействует с теми же самыми ко-рецепторами на Т-клетках, что и молекулы CD80, CD28 и CD 152 (CTLA-4). Однако взаимодействие CD86 с CD152 в 20-100 раз более высокоаффинно, чем с CD28. Молекула CD86 экспрессируется в низкой плотности дендритными клетками периферической крови и очень высокой плотности на моноцитах. На лимфоцитах CD86 появляется как антиген активации В-клеток, экспрессируется в основном В-клетками памяти и В-клетками герминального центра, но полностью отсутствует на плазматических клетках. Его экспрессия может быть повышена путем активации через поверхностные иммуноглобулины, CD40, молекулы МНС (главного комплекса гистосовместимости) класса II или действием РМА (ацетата фарболмиристата) в присутствии иономицина.

При системной красной волчанке продукция аутоантител находится в зависимости от Т-клеток. Для надлежащего взаимодействия Т- и В-клеток необходима передача сигналов ко-стимуляторными молекулами на этих клетках. Было показано, что экспрессия CD80 на CD19+ В-клетках низкая и не коррелирует с тяжестью болезни, тогда как количество CD19 В-клеток, экспрессирующих CD86, увеличено и коррелирует с тяжестью заболевания. С другой стороны, продукция аутоантител В-клетками при системной красной волчанке в присутствии активированных Т-клеток может быть подавлена антителами против CD86, но не против CD80. Таким образом, наиболее полную характеристику относительного количества В-клеток и их субпопуляционного состава можно получить при следующей комбинации моноклональных антител: CD5/CD19/ CD27/CD45. Использование морфологических параметров (малоуглового светорассеяния - FS, рассеяния света под углом 90-SS) для локализации пула лимфоцитов достаточно часто приводит к получению некорректных результатов. Это связано, как правило, с неполным лизисом эритроцитов, попаданием базофилов в зону лимфоцитов и т. д. Для определения состояния иммунной системы и ее аномалий более корректной представляется локализация лимфоцитов на основе экспрессии панлейкоцитарного антигена CD45. При многоцветовом цитофлюориметрическом анализе (более трех цветов) и многостадийном выборе зоны лимфоцитов с использованием GD45 исключается попадание клеток другой этиологии (не лимфоцитов) в конечный результат исследования. Таким образом, при иммунофенотипировании В-лимфоцитов предпочтительнее использование именно CD45 для выбора зоны анализа лимфоцитов.

В связи с тем что молекула CD19 представляет собой специфический маркер В-клеток и не встречается на других популяциях клеток периферической крови, данный антиген рекомендуют для количественной оценки общей популяции В-клеток. Дополнительное логическое ограничение по СD19-позитивным клеткам позволяет четко локализовать как В-1-клетки (CD19+CD5+), так и В-клетки памяти (CD19+CD27+).

Таким образом, оценка и характеристика В-клеточной популяции лимфоцитов является не только важной задачей с точки зрения научных интересов, но и позволяет практикующему врачу подтвердить или снять диагноз аутоиммунного процесса. В свою очередь, качественная оценка изменения количества В-клеток позволяет не только выявить степень активности процесса воспаления и его адекватности, но и оценить активность самих В-клеток в ходе иммунной реакции. В то же время современные подходы позволяют оценить эффективность уже сформировавшегося ответа по наличию В-клеток памяти. Расширение потенциальных возможностей современной проточной цитометрии значительно увеличивает вероятность и точность оценки всех этих диагностически значимых моментов. Многоцветовое окрашивание и многоэтапное гейтирование позволяют провести многопараметрический анализ клеток периферической крови с высокой точностью и достоверностью в одной пробе крови пациента. Данный подход значительно облегчает интерпретацию полученных результатов анализа и позволяет судить о функционировании В-клеточного звена иммунной системы пациентов при разнообразных патологических состояниях.

Т-ЛИМФОЦИТЫ И ИХ СУБПОПУЛЯЦИИ
Многие микроорганизмы, обитая внутри клеток организма-хозяина, недоступны для гуморального иммунитета, т. е. антител. В частности, вирусы способны размножаться только внутри клеток, используя репликационную систему клеток хозяина. Факультативно внутриклеточные микроорганизмы, такие как микобактерии и лейшмании, могут размножаться как в клетках, главным образом в макрофагах, так и вне клеток, но внутриклеточный способ существования для них более предпочтителен, поскольку обеспечивает защиту от иммунной системы. Против внутриклеточных микроорганизмов в организме действует особый механизм приобретенного иммунитета, а именно клеточный иммунитет. Он обеспечивается отдельной субпопуляцией лимфоцитов — Т-клетками. В отличие от В-клеток они дифференцируются в тимусе, откуда и их название. Т-лимфоциты специализиру¬ются на уничтожении клеток организма-хозяина, которые инфицированы внутриклеточно размножающимися возбудителями инфекции. Т-лимфоциты играют важную роль в элиминации опухолевых клеток, в реакциях «трансплантат против хозяина» и «хозяин против трансплантата», гиперчувствительности замедленного типа и других реакциях организма, направленных на поддержание гомеостаза.

Оценка как относительного, так и абсолютного количества Т-клеток и их основных субпопуляций широко распространена в лабораторной практике. При иммунофенотипировании лимфоцитов эти данные являются диагностически значимыми при различных патологических состояниях, включая первичные и вторичные иммунодефициты. Динамика изменения субпопуляционного состава Т-лимфоцитов при некоторых патологиях представляет значительную ценность для контроля эффективности терапии, прогноза течения заболевания.

К маркерам, характеризующим линию Т-лимфоцитов, в первую очередь относится Т-клеточный рецептор (T-cell Receptor — TcR). TcR — поверхностный специфический рецептор для распознавания антигена, является гетеродимером, состоящим из двух цепей с молекулярной массой 40-50 кДа, которые не являются продуктами генов иммуноглобулинов. Существует два вида TcR, каждый из которых ассоциируется с разными типами Т-лимфоцитов. TcRl, состоящий из у- и 5-цепей, появляется на ранних стадиях онтогенеза. TcR2 состоит из а- и b-цепей. Каждая цепь образует два домена: один из них имеет относительно неизменную структуру, гомологичную характерной укладке цепи иммуноглобулинов, а другой обладает большей структурной изменчивостью, поскольку по своему строению напоминает вариабельные домены иммуноглобулинов.

Примерно 81,4-98,4% Т-лимфоцитов представляют собой вариант ар-TcR и обозначаются как ap-T-клетки. Остальные 1,6-8,9% Т-лимфоцитов несут на своей поверхности TcR и обозначаются как Т-клетки. аb-Т-клетки подразделяются на две различные неперекрывающиеся субпопуляции. Клетки одной из них несут маркер CD4 и в основном способствуют осуществлению иммунного ответа или индуцируют его. Эта субпопуляция получила название Т-хелперов. Т-клетки другой субпопуляции несут маркер CD8 и обладают преимущественно цитотоксической активностью.

Небольшая часть оср-Т-клеток и большинство Т-клеток, циркулирующих в периферической крови, не экспрессируют CD4 и CD8. Однако некоторые из них все же экспрессируют молекулы CD8. Напротив, большая часть Т-клеток в тканях экспрессируют CD8. Кроме молекулы CD8, Т-клетки на своей поверхности могут экспрессировать CD56, CD94, CD161. В свою очередь, цитотоксическую активность Т-клеток возможно стимулировать через CD122 b-цепь рецептора интерлейкина-2).

Одной из особенностей уb-Т-клеток в отличие от ab-T-клеток является то, что они распознают непептидные антигены, полученные из микробных патогенов, независимо от главного комплекса гистосовместимости. Эта субпопуляция выполняет ряд важных функций, так как они могут усиливать иммунный ответ, производя большие количества интерферона у (IFN-y), фактора некроза опухоли (TNF-oc) и хемокинов. Кроме этого, уb-Т-клетки имеют эффекторную (цитотоксическую) активность. С эволюционной точки зрения уb-Т-клетки занимают уникальное место между высокоспецифичными ab-T-клетками и врожденной иммунной системой для выполнения защиты организма от патогенов. Доказана существенная роль уb-Т-клеток в устойчивости организма против целого ряда микроорганизмов, так, функциональную значимость уb-Т-клеток отмечали в устойчивости к Mycobacterium, Borettia, Francisella tularensis, Salmonella и вирусам, включая ВИЧ. Кроме того, уb-Т-клетки играют важную роль и в противоопухолевом ответе, описано значительное увеличение этих клеток у пациентов с некоторыми видами лимфом. уb-Т-клетки также участвуют в восстановлении эпителия и поддержании гомеостаза. С другой стороны, уb-Т-клетки могут быть вовлечены в патогенез некоторых иммунопатологических состояний, таких как сахарный диабет, аутоиммунные расстройства, болезнь Бехчета, бронхиальная астма.

Содержание уb-Т-клеток в периферической крови может варьировать, существуют половые и возрастные различия. Их количество увеличивается с момента рождения до половозрелости и в дальнейшем постепенно снижается. У женщин количество уb-Т-клеток несколько выше и высокий уровень сохраняется значительно дольше, чем у мужчин.

В ответ на действие специфического антигена уb-Т-клетки обладают быстроначинающейся (после 4-6 дней), высокой (в 200 раз) и длительной (более 7 мес) пролиферативной способностью. Кроме того, в течение иммунного ответа анти- генспецифические уb-Т-клетки могут составлять до 48-98% общего количества циркулирующих уb-Т-клеток. Таким образом, обнаружение увеличенной циркулирующей субпопуляции уb-Т-клеток позволяет предположить недавнюю или текущую хроническую антигенную стимуляцию, особенно на слизистых оболочках или участках кожи, что, в свою очередь, позволяет практикующим врачам заподозрить медленно прогрессирующее заболевание инфекционной природы.

На клеточной поверхности и аb-, и уb-антигенраспознающие рецепторы Т-клеток расположены непосредственно рядом с полипептидным комплексом, имеющим групповое название CD3. Это соседство и ассоциация с CD3 являются необходимым условием для экспрессии всего рецепторного комплекса на поверхности клеток.

Антиген CD3 представляет собой комплекс 5 инвариантных полипептидных цепей, молекулярные массы которых составляют соответственно 25-28,21, 20,16 и 22 к Да. Полипептидная цепь находится в СDЗ-комплексе как гомодимер, связанный дисульфидным мостиком, или как гетеродимер с b-цепью. Комплекс CD3, в свою очередь, является частью значительно большего комплекса, который включает TcR. Этот комплекс экспрессируется зрелыми Т-лимфоцитами и тимоцитами. Активация Т-клеток может быть вызвана за счет взаимодействия TcR с антигеипредставляющими клетками, несущими процессированный чужеродный антиген в комплексе с антигенами МНС I и II класса. СD3-цепь экспрессируется также NK-клетками и большинством (более 90%) клонов клеток, являющихся производными децидуальных гранулярных лимфоцитов, которые СDЗ-отрицательны.

Приведенные факты свидетельствуют в пользу более полной характеристики Т-клеток пациента, анализ следует проводить не только по такому линейноспецифическому маркеру, как CD3, но и по наличию субпопуляций аb-Т-клеток и уb-Т-клеток. Определение последних важно для целого ряда заболеваний, в первую очередь к ним относятся ВИЧ-инфекция, вторичные и первичные иммуно- дефицитные состояния, сопровождающиеся длительной персистенцией микроорганизмов в организме человека на фоне депрессии Т-клеточного звена иммунной системы. Особенно важным определение уb-Т-клеток становится при оценке общего количества Т-клеток в тех случаях, когда от их количества зависит доза препаратов, например назначение антиретровирусной терапии ВИЧ-инфицированным пациентам.

Количественный анализ Т-клеток является наиболее востребованным исследованием для иммунологического контроля состояний приобретенного иммунодефицита, мониторинга за пациентами после трансплантации костного мозга и эффективности иммунодепрессивной терапии. Стандартные протоколы иммунофенотипирования, использующие 4 цвета, позволяют проводить идентификацию субпопуляций Т-лимфоцитов в одном образце. Этот анализ представляет исследователю намного больше информации, но до последнего времени она находилась вне зоны внимания врачей-клиницистов.

При использовании комбинации моноклональных антител CD3/CD4/CD8/ CD45 при обычном анализе периферических Т-клеток достаточно часто наблюдается бимодальное распределение экспрессии CD3, которое предполагает наличие двух субпопуляций Т-клеток. Помимо молекул CD3, антигенспецифический Т-клеточный рецептор является другим пан-Т-клеточным маркером, который необходимо использовать при анализе данных пациентов с иммунологическими расстройствами. Как было описано выше, существует два различных типа TcR: оb-TcR и уb-TcR, различающихся по онтогенезу и функциональным свойствам. В медицинской практике, как правило, внимание врачей-клиницистов сосредоточено прежде всего на ар-Т-клетках, составляющих большую часть Т-лимфоцитов. Оставшиеся около 5% уb-Т-клеток, как правило, выпадают из зоны внимания врачей-клиницистов, их рассматривают исключительно при исследовании иммунитета слизистых оболочек и в тимусе.

Однако уb-Т-клетки играют значительную роль в защите организма от различных типов инфекций, знание об их количественном составе должно быть неотъемлемой частью анализа иммунного статуса пациентов. Комбинация моноклональных антител CD3/CD4/CD8/CD45 дает не только основную информацию о наличии Т-клеток и их основных субпопуляций, но и позволяет обратить внимание на неоднородность распределения СD3-молекулы, если она есть. В этом случае необходимо проверить контрольную сумму CD3-позитивных клеток (CD4+CD8+должно равняться общему количеству CD3). В случае если контрольная сумма не совпадает с общим количеством СОЗ+-лимфоцитов, следует проверить субпопуляционный состав Т-клеток на наличие ар-TcR и уб-TcR. Данный этап необходим, так как большинство уb-Т-клеток, циркулирующих в периферической крови, дважды отрицательны. Другая их особенность заключается в том, что они имеют более высокую плотность экспрессии молекулы CD3 на своей поверхности CD3.

Таким образом, для наиболее полной фенотипической характеристики Т-лимфоцитов и правильного назначения химиотерапевтических препаратов, направленных на восстановление нормального функционирования защитных систем организма, необходимо проводить анализ не только линейно-специфического маркера Т-клеток CD3, но и определять субпопуляционный состав Т-клеток по экспрессии Т-клеточного рецептора, а именно уb- и аb-TcR. Для этих целей следует использовать многоцветовой анализ и следующие комбинации моноклональных антител: CD3/CD4/CD8/CD45.

Помимо описанных выше популяций Т-клеток, в крови человека можно локализовать как наивные Т-клетки, так и Т-клетки памяти, различающиеся между собой по функциональным и фенотипическим признакам. Жизненный цикл Т-клеток в организме делится на две фазы: независимую от чужеродного антигена стадию дифференцировки Т-клеток и стадию, связанную с присутствием чужеродного антигена. Первая завершается появлением в кровотоке зрелых наивных Т-лимфоцитов, каждый из которых способен отвечать только на «свой» антиген. Стимулированные антигеном в ходе первичного ответа Т-клетки проходят дальнейшую дифференцировку.

Все Т-клетки памяти появляются в результате дифференцировки активированных антигеном наивных предшественников в ходе нормального развития первичного иммунного ответа in vivo. Экспрессия на клеточной поверхности различных изоформ молекулы CD45 позволяет разделить CD4+ Т-лимфоциты человека на наивные Т-клетки и Т-клетки памяти. Принято относить субпопуляцию CD4+CD45RA-CD45R0+ Т-лимфоцитов к Т-клеткам памяти и соответственно CD4+CD45RA+CD45R0 — к наивным Т-клеткам. Подобное разделение основано исключительно на способности CD4+CD45RACD45R0+ Т-клеток, а не наивных Т-лимфоцитов, интенсивно отвечать на повторный контакт с антигеном in vitro. В свою очередь, быстрый и усиленный ответ Т-клеток памяти на специфический антиген является их важнейшим функциональным отличием от наивных предшественников.

Покоящиеся CD4+Т-лимфоциты памяти также отличаются от наивных предшественников системой внутриклеточной сигнализации, приводящей к резистентности к действию Са2+ионофоров. Чувствительная к действию Са2+ионофоров популяция CD4+Т-клеток человека составляет основную часть покоящихся наивных CD4+CD45RA+CD45R0+Т-лимфоцитов. В свою очередь, большинство резистентных к действию ионофоров CD4+Т-клетки являются покоящимися CD4+CD45RA-CD45R0+Т-лимфоцитами памяти.

Основная методическая сложность в исследованиях процесса дифференцировки СD4+Т-лимфоцитов в периферической крови связана с тем, что активированные клетки составляют лишь незначительную часть. Как правило, в крови здоровых доноров доля активированных CD4+Т-клеток составляет менее 10% общего количества CD4+Т-лимфоцитов.

Однозначным фенотипическим признаком дифференцировки покоящихся наивных CD4+CD45RA+CD45R0+Т-лимфоцитов человека в покоящиеся Т-клетки памяти принято считать появление на поверхности клеток молекул CD45R0 взамен изоформы CD45RA. Данная особенность позволяет выявить три субпопуляции CD4+Т-лимфоцитов человека: покоящиеся наивные CD45RA+CD45R0-Т-клетки, покоящиеся CD45RA-CD45R0+Т-клетки памяти и активированные CD45RA+CD45R0+ Т-клетки. Зрелых CD4+CD45RA-CD45R0+Т-лимфоцитов в периферической крови человека не существует. Все активированные CD4+CD45RA+CD45R0+Т-лимфоциты появляются в процессе стимуляции наивных клеток антигеном in vivo.

Определение относительного количества CD4+CD45RA+CD45R0 и CD4+CD45RA+CD45R0+ - лимфоцитов полезно для диагностических целей. При развитии инфекции или при хирургическом вмешательстве происходит накопление доли CD4+CD45RA- CD45R0+ клеток и снижение CD4+CD45RA+CD45R0. Для более точной идентификации этих субпопуляций Т-клеток, как правило, используют многоцветовой анализ и комбинацию моноклональных антител CD4/CD45RA/CD45R0/CD45.

Появление молекул CD69 считают основным фенотипическим признаком наиболее ранней (первые часы) стадии активации наивных CD4+Т-лимфоцитов. Как правило, в крови здоровых доноров не удается обнаружить присутствие более чем 1-4% CD4+CD69+Т-клеток. Экспрессия молекул CD25 на поверхности CD4+Т-лимфоцитов обычно рассматривается как специфический признак стадии, зависимой от антигена интенсивной пролиферации активированных Т-клеток. Отсутствие в крови здоровых доноров зрелых CD4+CD69+CD25+Т-клеток позволяет корректно разграничить данную стадию активации Т-клеток от предыдущей.

Популяция CD4+CD25+Т-лимфоцитов человека гетерогенна по функциональным свойствам и фенотипическим признакам. Она включает популяции пролиферирующих CD4+CD45RA+CD45R0+CD251 Т-клеток и регуляторных (T-reg) CD4+CD45R0+CD25high Т-лимфоцитов. Являясь супрессорами, они играют ведущую роль во многих иммунологических процессах (таких как аутоиммунные заболевания, трансплантационный иммунитет, противоопухолевый ответ и иммуногомеостаз): регулируют Т-клеточный гомеостаз, предотвращают аутоиммунные заболевания, аллергии, гиперчувствительность, реакции «трансплантант против хозяина». Однако регуляторные Т-клетки снижают противоопухолевый иммунитет и иммунитет к инфекциям.

T-reg-клетки имеют фенотип CD3+CD4+CD25 CD45R0+CD95% но наиболее важным их маркером является FOXP3, который кодирует фактор транскрипции и является главным регулирующим геном для развития и функционирования СD4+С025>1 регуляторных Т-клеток. В настоящее время самым точным маркером для идентификации T-reg-клеток является фактор транскрипции FOXP3. Однако идентификация этого маркера требует пермеабилизации клеток, что затрудняет работу по идентификации T-reg-клеток.

Таким образом, окончательный фенотип T-reg-клеток будет выглядеть следующим образом: CD3+CD4+CD25brightCD127dim to nesFOXP3+, но для их определения можно использовать фенотип T-reg без выявления FOXP3. Для более точной локализации T-reg-клеток предпочтительнее использовать многоцветовой анализ и многоэтапное гейтирование с использованием набора моноклональных антител CD45/CD4/CD25/CD127.

NK-КЛЕТКИ И ИХ СУБПОПУЛЯЦИИ
К одной из наиболее важных популяций иммунокомпетентных клеток относятся NK-клетки. Среди больших гранулярных лимфоцитов (Large Granular Lymphocytes — LGL) выделяют отдельную популяцию клеток, получившую название естественных киллеров, или NK-клеток (Natural Killer). За счет цитолитической активности против клеток-мишеней и способности продуцировать цитокины NK-клетки являются важным компонентом врожденной иммунной системы. Первоначально они были описаны на основании их функциональной способности уничтожать клетки некоторых опухолей гемопоэтического происхождения без предшествующей стимуляции. Таким образом, одной из основных функций данной субпопуляции иммунокомпетентных клеток является защита организма от видоизмененного своего.

NK-клетки являются носителями двух основных функций: первая - лизис опухолей и клеток, инфицированных вирусами, вторая - регуляция врожденного и адаптивного иммунных ответов с помощью секреции хемокинов (CCL3, CCL4, CCL5 и XCLX) и цитокинов (GM-CSF, TNF-ot и IFN-y). Способность NK-клеток взаимодействовать и ликвидировать опухолевые клетки возможна за счет нескольких специализированных рецепторов, распознающих молекулы МНС класса I. Эти рецепторы формируются на NK-клетках при ассоциации молекул CD94 с молекулами семейства NKG2 (CD159).

В свою очередь, NK-клетки являются субпопуляцией лимфоцитов, наиболее чувствительной к физиологическим и психологическим стрессам. Доказано выраженное воздействие высоких физических нагрузок на NK-клетки. Их цитолитическая активность увеличивается при нарастании физической нагрузки и уменьшается после ее окончания в течение нескольких часов. Это отражается главным образом на распределении NK-клеток с небольшими изменениями их цитотокси- ческой активности.

В периферической крови NK-клетки составляют 5-20% циркулирующих лимфоцитов. В табл. 3-4 приведены примеры взаимосвязи изменения активности и количества NK-клеток с клиническими признаками или увеличением риска заболеваний у людей. Относительное количество NK-клеток и их активность существенно изменяются не только при опухолевых процессах и вирусной инфекции, но и при гнойном воспалении, нарушении функций центральной нервной системы, аутоиммунных заболеваниях и т.д. Вероятно, что в результате применения более тонких и точных методов, таких как проточная цитометрия и многопараметрический анализ, будут выявлены и другие изменения в субпопуляциях этих клеток при различных патологиях.

Для локализации NK-клеток среди других лимфоцитов используют моноклональные антитела, распознающие различные маркеры, экспрессируемые на их поверхности. Однако многие поверхностные молекулы NK-клеток представлены и на других субпопуляциях лимфоцитов, что накладывает свои особенности на идентификацию этих клеток. Для их выявления среди других лейкоцитов используют уникальную комбинацию из нескольких маркеров, таких как CD56 и CD16. В то же время NK-клетки не экспрессируют такие линейные маркеры, как CD3, CD14 и поверхностные Ig, и это также используется при их локализации.

Одним из основных маркеров, используемых для выявления NK-клеток, является молекула CD16. Антиген CD16 представляет собой низкоаффинный рецептор для IgG (FcyRlII). Данный антиген существует в двух различных формах, кодируемых двумя различными генами: FcyRIIIA (или III-2) и FcyRIIIB (или III-1). Генетическая разнородность CD16 приводит к альтернативным путям ассоциации молекул с мембраной клеток. Первая, трансмембранная форма (FcyRIIIA, 50-65 кДа) экспрессируется на NK-клетках, моноцитах и макрофагах. Другая форма (FcyRIIIB, 48 кДа), ассоциированная с мембраной за счет гликозилфосфатидилинозитола (GPI), экспрессируется только на нейтрофилах. Антиген CD 16 на мембране NK-клеток может быть нековалентно связан с гомо- или гетеродимерами, состоящими из СDЗ-цепи и FceRIy-цепи, которые, в свою очередь, связаны между собой дисульфидными мостиками.

Другим антигеном является молекула CD56. Данный антиген представляет собой изоформу N-CAM с молекулярной массой 140 кДа. Посттрансляционные модификации полипептида N-CAM включают N- и О-гликозилирование, ацилирование, сульфатирование и фосфорилирование. Различные изоформы N-САМ имеют молекулярную массу в пределах 135-220 кДа. CD56-антиген умеренно экспрессируется на субпопуляциях клеток периферической крови, таких как большие гранулярные лимфоциты, и всех клет¬ках с NK-активностью. Молекула CD56 также экспрессируется отдельными субпопуляциями Т-лимфоцитов.

Циркулирующие зрелые NK-клетки имеют фенотип CD3-CD56+CD16+CD2dim и отличаются от Т-клеток отсутствием Т-клеточного рецептора и CD3. Отличие от В-клеток заключается в том, что NK-клетки никогда не экспрессируют мембранные Ig, но за счет экспрессии FcyRIII они могут быть позитивными при окрашивании антителами. Поверхностные маркеры, экспрессируемые активированными NK-клетками, включают ряд молекул, таких как CD25, другие типы Fc-рецепторов, интегрины, различные активационные антигены, включая HLA-DR, CD71 и CD69. В зависимости от степени активации NK-клеток поверхностные рецепторы могут менять свою экспрессию за счет повышения или понижения.

Популяция NK-клеток обладает достаточной гетерогенностью по составу. Выделяют несколько подтипов этих клеток, а именно npe-NK-клетки, зрелые NK-клетки и активированные NK-клетки, у которых различна экспрессия маркеров клеточной поверхности. Среди популяции циркулирующих NK-клеток выделяют две основные субпопуляции: первая экспрессирует CD 16 и низкий уровень CD56 (CD16+(OThigh)CD56dim), вторая экспрессирует CD56, но CD16 на них представлен в низкой плотности или полностью отсутствует. Последняя субпопуляция составляет приблизительно 10-20% общего количества NK-клеток. Они секретируют интерферон у и другие цитокины, имеют меньшую цитолитическую активность. В свою очередь, субпопуляция CD16highCD56dim составляет приблизительно 80-90% NK-клеток периферической крови, они слабо секретируют цитокины, но обладают высокой цитолитической активностью.

NK-клетки экспрессируют на своей поверхности многочисленные маркеры: CD2, CD5, CD7, CD8, CD94, CD96, CD158, CD159 и др. Однако для локализации и характеристики NK-клеток наиболее широко используют двухпараметрический анализ экспрессии CD16 и/или CD56 на СОЗ-негативных клетках. Данная комбинация моноклональных антител позволяет локализовать общую популяцию NK-клеток и количественно охарактеризовать ее, но не подтипы клеток.

Достаточно часто NK-клетки экспрессируют на поверхности a-цепи CD8, но в более низкой плотности, чем цитотоксические Т-клетки. Показано, что субпопуляции NK-клеток человека, экспрессирующие гомодимер CD8, обладают большей цитотоксичностью, чем CD8-NK-клетки. Соединение CD8 а-цепей в гомодимер индуцирует быстрое повышение внутриклеточных ионов Са2+ и инициированное этим увеличение экспрессии CD69. Хотя секреция цитолитических ферментов инициирует апоптоз NK-клеток, приток экзогенных ионов Са2+ защищает CD8a+ NK-клетки от этого. Эта защита от апоптоза может быть снята преинкубацией NK-клеток с антителами против МНС класса I. Таким образом, данный механизм позволяет CD8a+ NK-клеткам сохранять жизнеспособность и участвовать в лизисе клеток-мишеней.

Большое внимание уделяют экспрессии CD38 на поверхности NK-клеток. Молекула CD38 - мембранный гликопротеин, представляющий собой фермент, регулирующий концентрацию цитоплазматического кальция. Кроме того, данный фермент обладает рядом других активностей: аденозиндифосфат-рибозил-циклазной, циклической аденозиндифосфат-рибозил-гидролазной и NAD-гликогидролазной. Данная молекула также выполняет роль рецептора, модулируя межклеточные взаимодействия, и является переносчиком трансмембранных сигналов. Молекула CD38 экспрессируется на активированных Т-, В-, NK-клетках и других типах клеток.

Вызванный NK-клетками цитотоксический эффект на клетки-мишени сопровождается тесным контактом между ними, причем этот контакт предшествует выбросу цитотоксических гранул. Таким образом, ведущую роль в установлении этого контакта выполняют молекулы клеточной адгезии. Данные молекулы также вовлечены в сигнальную систему, приводящую к выбросу цитотоксических гранул. Молекулы LFA-1 на лимфоцитах и ICAM-1 на клетках-мишенях представляют собой основу для межклеточных взаимодействий цитотоксических лимфоцитов и реализации их функции. LFA-1 - гетеродимерный рецептор, формирующийся в результате ассоциации цепи аь-интегрина (CDlla) с цепью р2-интегрина CD18. Антитела, взаимодействующие с молекулами LFA-1, блокируют цитотоксичность, вызываемую NK-клетками. У пациентов с заболеванием, связанным с дефицитом адгезии лейкоцитов, отмечается недостаток как в LFA-1, так и в активности NK-клеток. Данная аномалия является генетически обусловленным дефектом CD18. Для выявления NK-клеток, обладающих цитотоксической активностью и способных ее реализовать, необходима локализация NK-клеток, экспрессирующих молекулы CD11a, причем необходимо оценивать не только наличие CD11a на NK-клетках, но и плотность экспрессии данных молекул. 

Таким образом, для наиболее полной характеристики NK-клеток необходимо определить на СDЗ-негативных клетках следующие поверхностные маркеры: CD16, CD56, CD38, CD8 и LFA-1. При этом CD38, CD8 и LFA-1 позволяют оценить цитотоксическую активность NK-клеток пациента и, как следствие этого, более корректно представлять картину, происходящую на данном этапе развития иммунного ответа. Для этих целей рекомендуют использовать следующие комбинации моноклональных антител: CD3/CD16/CD56/CD45, CD3/CD8/CD38/CD45 и CD3/CDlla/CD56/CD45.
Применение двухцветового окрашивания лимфоцитов с использованием ком¬бинации антител CD3, CD56+CD16 позволяет локализовать NK-клетки и оценить их абсолютное и относительное количество. Однако в этом случае отсутствует возможность определить их подтипы.

Другим вариантом окрашивания лимфоцитов для выявления NK-клеток является использование комбинации антител CD16 и CD56. Но в этом случае результат получается несколько завышенным, поскольку дополнительный вклад вносят Т-клетки, так как они могут экспрессировать на своей поверхности CD56 и CD16. Это особенно ярко проявляется при различных заболеваниях, когда резко возрастает количество Т-клеток, экспрессирующих данные структуры. Задачу разделения этих типов клеток позволяет решить применение многоцветового анализа и комбинации моноклональных антител CD3/CD16/CD56/CD45. CD45 используют для локализации всей популяции лимфоцитов, что является более корректным по сравнению с гейтированием по морфологическим параметрам FS и SS. В свою очередь, CD3 позволяет исключить из анализа Т-клетки.

CD38+CD8+ NK-клетки обладают высокой цитолитической активностью, поэтому знание о наличии данной субпопуляции, относительном и абсолютном ее количестве имеет важное диагностическое значение. Для локализации CD38+CD8+ NK-клеток возможно использование двухпараметрического анализа, но более корректно применять трех- и четырехцветовой анализ (CD3/CD8/CD38 и CD3/ CD8/CD38/CD45).

В случае использования комбинации CD3/CD8/CD3S для выделения лимфоцитов используют морфологические параметры, однако существует вероятность исключения из анализа части больших гранулярных лимфоцитов, которые могут просто не попасть в выделенную зону при гейтировании. Использование CD45 для локализации всей популяции лимфоцитов является более корректным. Комбинация моноклональных антител CD3/CD8/CD38/CD45 и многоэтапное позитивное и негативное гейтирование позволяют четко выделить активированные NK-клетки. Дальнейший анализ проводят на отдельных гистограммах с использованием логических ограничений по зонам позитивных и негативных по CD3 клеток. На гистограмме, полученной с использованием гейтирования по CD3+, находят активированные цитотоксические Т-клетки с фенотипом CD8brightCD38+.

Аналогичная процедура, но с гейтированием по зоне СDЗ-негативных клеток, позволяет выявить активированные NK-клетки с фенотипом CD8dimCD38+. Данное утверждение правомерно, поскольку CDS экспрессируется не только на Т-клетках, но и на части популяции СDЗ-негативных клеток, а именно NK-клетках. Таким образом, используя комбинации моноклональных антител, можно в одном образце выявить активированные цитотоксические Т-клетки и активированные NK-клетки. В последние годы становится весьма очевидной необходимость при типировании NK-клеток выявлять общее количество и содержание отдельных их субпопуляций. NK-клетки и их цитотоксическая функция имеют ведущее значение при опухолевых и вирусиндуцированных процессах. Регуляторная функция у отдельных субпопуляций NK-клеток ставит вопрос об их клиническом и патогенетическом значении.

Данные о наличии активационных рецепторов NK-клеток позволяют поновому оценить их функциональную активность, не осуществляя трудоемких и весьма затратных экспериментов по киллингу клеток-мишеней. Появилась возможность оценить степень воздействия медикаментозной терапии на собственно NK-клетки как в норме, так и при патологии, как in vivo, так и in vitro. Это позволяет значительно расширить возможности клинической фармакологии по поиску средств, влияющих непосредственно на данную группу клеток (химиотерапия опухолей, противовирусная терапия и др.).

Изучение субпопуляций NK-клеток и их функциональной активности может повлиять на представления о природе патологических процессов. Это весьма важно как для известных патологий, где значение NK-клеток уже определено, так и для других процессов, при которых значимость врожденных механизмов иммунитета недостаточно изучена. Как следствие, новые данные могут способствовать более корректной иммунотерапии различных патологических состояний с учетом ее влияния на данные клетки.

Использование возможностей современной проточной цитометрии позволяет получить более точные данные о протекающих в организме изменениях в короткие сроки. В свою очередь, применение 3, 4 и более флюоресцентных меток позволяет более корректно интерпретировать клинико-лабораторные результаты обследования пациентов с различными патологиями, в основе которых лежат механизмы нарушений количества и активности NK-клеток.

Оцените статью: (10 голосов)
3.8 5 10

Статьи из раздела Лабораторная диагностика на эту тему:
Аналитические характеристики проточной цитофлюориметрии
Возможности проточной цитометрии
Ограничения проточной цитометрии
Основы проточной цитофлюориметрии
Преимущества проточной цитофлюориметрии


Новые статьи

» Стронгилоидоз
Стронгилоидоз
Стронгилоидоз - хронически протекающий геогельминтоз с преимущественным поражением ЖКТ и общими аллергическими проявлениями. Основной источник заражения стронгилоидозом - больной человек. Некоторые... перейти
» Трихинеллез
Трихинеллез
Трихинеллез у человека - это острый зооноз с природной очаговостью, протекающий с лихорадкой, мышечными болями, отеком лица, кожными высыпаниями, высокой эозинофилией, а при тяжелом т... перейти
» Энтеробиоз
Энтеробиоз
Энтеробиоз - кишечный гельминтоз, вызываемый мелкой нематодой Enterobius vermicularis, со стертым и невыраженным течением, наиболее распространенный признак которого - перианальный зуд, возникающий на... перейти
» Аскаридоз
Аскаридоз
Аскаридоз - кишечный гельминтоз, вызываемый нематодой Ascaris lumbricoides, протекающий с поражением ЖКТ, интоксикацией, аллергическими реакциями. Аскаридоз - один из самых распространенных гельмин... перейти
» Альвеококкоз
Альвеококкоз
Альвеококкоз (Alveococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепней Echinococcus multilocularis, с хроническим прогрессирующим течением, развитием в печени и других органах мн... перейти
» Эхинококкоз
Эхинококкоз
Эхинококкоз (Echinococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепня Echinococcus granulosus, характеризуемый хроническим течением и развитием преимущественно в печени, реже в л... перейти