MEDDAILY.INFO
медицинская энциклопедия
ГлавнаяКарта сайта Контакты
 

Секвенирование генов

фото Секвенирование генов
Прямое секвенирование ДНК основано на синтезе in vitro исследуемого участка гена с применением ДНК-полимеразы, меченых дезоксирибонуклеозидтрифосфатов и праймеров, после чего устанавливается позиция меченого нуклеинового основания. Метод определения последовательностей (сиквенсов) РНК, считываемых с матрицы ДНК, основан на использовании радиоактивных фрагментов ДНК. Короткие полинуклеотидные участки подвергаются полимеразной реакции в присутствии или отсутствии каждого из 4 дезоксирибонуклеозидтрифосфата (так называемый плюс-минус метод). При отсутствии того или иного нуклеотида рост цепочки прерывается перед соответствующей позицией его в цепочке исходной ДНК, а при их наличии идет далее. Продукты реакции фракционируют путем электрофореза, сравнивают по длине и делают выводы о позициях каждого из 4 нуклеотидов в коротких фрагментах. Этот подход применим для секвенирования ДНК в небольших участках генов фагов и вирусов.

Современный, более эффективный и быстрый способ секвенирования ДНК основан на копировании изучаемого участка ДНК посредством ДНК-полимеразы. Главное отличие от прямого секвенирования состоит в том, что в реакционную смесь добавляют один из нуклеотидов в форме дидезоксиНТФ.


При включении его в ДНК рост цепочки прекращается, т. е. тот или иной дезоксирибонуклеозидтрифосфат служит в качестве «терминатора» синтеза. С изучаемым образцом ДНК ставятся одновременно четыре реакции с каждым из 4 дезоксирибонуклеозидтрифосфата. Затем продукты реакций наносят на полиакриламидный гель, оценивают их относительную длину (т. е. место прерывания синтеза) и позицию данного нуклеотида в последовательности участка гена. Именно этот метод в 1980-х гг. получил применение в клинических исследованиях, в частности при анализе тонких генетических различий (генных вариантов), что оказалось крайне важным для идентификации индивидуальных молекулярно-генетических признаков. Данный способ лег в основу углубленного (higk-resolution) типирования генов гистосовместимости (генов системы HLA) у доноров и реципиентов по мере широкого внедрения в клинику аллогенной трансплантации костного мозга.

Оцените статью: (11 голосов)
4.18 5 11

Статьи из раздела Лабораторная диагностика на эту тему:
Гибридизационный анализ
Клиническое применение результатов исследования
Метод полимеразной цепной реакции
Методы молекулярной диагностики
Методы молекулярной клинической диагностики при установлении или уточнении диагноза заболевания


Новые статьи

» Стронгилоидоз
Стронгилоидоз
Стронгилоидоз - хронически протекающий геогельминтоз с преимущественным поражением ЖКТ и общими аллергическими проявлениями. Основной источник заражения стронгилоидозом - больной человек. Некоторые... перейти
» Трихинеллез
Трихинеллез
Трихинеллез у человека - это острый зооноз с природной очаговостью, протекающий с лихорадкой, мышечными болями, отеком лица, кожными высыпаниями, высокой эозинофилией, а при тяжелом т... перейти
» Энтеробиоз
Энтеробиоз
Энтеробиоз - кишечный гельминтоз, вызываемый мелкой нематодой Enterobius vermicularis, со стертым и невыраженным течением, наиболее распространенный признак которого - перианальный зуд, возникающий на... перейти
» Аскаридоз
Аскаридоз
Аскаридоз - кишечный гельминтоз, вызываемый нематодой Ascaris lumbricoides, протекающий с поражением ЖКТ, интоксикацией, аллергическими реакциями. Аскаридоз - один из самых распространенных гельмин... перейти
» Альвеококкоз
Альвеококкоз
Альвеококкоз (Alveococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепней Echinococcus multilocularis, с хроническим прогрессирующим течением, развитием в печени и других органах мн... перейти
» Эхинококкоз
Эхинококкоз
Эхинококкоз (Echinococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепня Echinococcus granulosus, характеризуемый хроническим течением и развитием преимущественно в печени, реже в л... перейти