MEDDAILY.INFO
медицинская энциклопедия
ГлавнаяКарта сайта Контакты
 

Применение ПЦР-диагностики в различных областях медицины

фото Применение ПЦР-диагностики в различных областях медицины
Методы клинической молекулярной диагностики получили широкое распространение в нашей стране и применяются в различных областях медицины, таких как:
• акушерство и гинекология;
• онкогинекология;
• дерматология и микология;
• иммунология (диагностика ВИЧ);
• фтизиатрия и пульмонология;
• гастроэнтерология и гепатология;
• гематология и онкология;
• неврология;
• урология;
• стоматология;
• изучение наследственных болезней и предрасположенностей к различным заболеваниям и т. д.

Ниже рассмотрены некоторые клинические аспекты применения молекулярных методов.

ГИНЕКОЛОГИЯ И АКУШЕРСТВО
Выявление и идентификация возбудителей инфекционных заболеваний являются одними из основных задач современной медицинской микробиологии. При микробиологических исследованиях возникают ситуации, когда использование традиционных культуральных, а также современных иммунохимических методов диагностики оказывается недостаточным для идентификации возбудителя, что заставляет создавать и внедрять принципиально новые методы выявления и идентификации патогенов.

В последнее десятилетие происходит стремительное развитие генетических методов диагностики инфекционных заболеваний, основанных на детекции специфических нуклеотидных последовательностей инфекционных агентов, среди которых лидирует метод полимерной цепной реакции и его модификации (полимерная цепная реакция и ее применение для диагностики в дерматовенерологии).

В диагностике инфекций, передающихся половым путем, полимерная цепная реакция нашла свое место для решения следующих задач:
• скрининга условно-патогенной флоры;
• оценки эффективности проведенной терапии;
• количественной оценки вирусной нагрузки. 

Благодаря своей высокой чувствительности метод полимерной цепной реакции позволяет выявлять инфекционный агент при минимальном содержании в исследуемом материале.


Это необходимо при бессимптомном течении инфекционного процесса, вызванного условно патогенными микроорганизмами.

Метод метод полимерной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени позволяет проводить многофакторные исследования качественного и количественного состава условно-патогенной флоры. Этот анализ дает врачу-клиницисту представление о состоянии биоценоза урогенитального тракта, этиологической причине дисбиоза и предоставляет возможность назначить необходимый объем терапии.

Полимерная цепная реакция как чувствительный и специфичный инструмент исследования биоценоза урогенитального тракта у женщин — это:
• количественная оценка условно-патогенной и нормальной флоры урогенитального тракта, выявление соотношений между различными группами микроорганизмов и общей бактериальной массой;
• выявление труднокультивируемых облигатно-анаэробных грамположительных бактерий, облигатно-анаэробных грамотрицательных бактерий.
• возможность проведения динамических наблюдений.

Такая технология позволяет врачу-клиницисту быстрее поставить диагноз и начать этиологически направленное лечение исходя из состояния конкретного пациента.

При выявлении пре- и перинатальных инфекций в дородовых отделениях часто возникает вопрос о наличии активных инфекций, особенно при экспозиции плода на ранних стадиях развития.


Эту группу инфекционных агентов, опасных для развивающегося плода, часто обозначают сокращением TORCH по их начальным буквам.
• Toxoplasma gondii.
• Вирус краснухи.
• Цитомегаловирус.
• Герпес-вирус.

Кроме того, в расширенный список входит еще ряд инфекционных агентов.
• Парвовирус (в особенности подвид В19).
• Вирус Коксаки В.
• Вирусы гриппа и парагриппа.
• Патогенные штаммы лептоспиры.
• Листерия (Listeria monocytogenes).
• Бледная трепонема.

В настоящее время существуют диагностические ПЦР-наборы с высокими чувствительностью и специфичностью для выявления перечисленных возбудителей.

ОНКОГИНЕКОЛОГИЯ
Особое место в онкогинекологии занимает диагностика вируса папилломы человека. Диагностика папилломатоза стала достоверной лишь с появлением методов, основанных на детекции нуклеиновых кислот, — гибридизации ДНК вирусса папилломы человека и полимеразной цепной реакции. В зависимости от целей и возможностей лабораторий широко применяются различные техники метод полимерной цепной реакции и/или ДНК- гибридизации. Среди подобных методик выделяется НС II, отличающаяся простотой выполнения и специфичностью.


В целом следует отметить, что методы, основанные на реакции гибридизации, менее чувствительны к случайным загрязнениям образцов в сравнении с ПЦР-диагностикой, что снижает частоту ложноположительных результатов.

Из десятков штаммов вируса папилломы человека около 1/3 считаются онкогенными. Их присутствие в организме ассоциируется с высоким риском развития рака шейки матки, гортани и других эпителиальных опухолей. Именно поэтому генная диагностика вируса папилломы человека в клетках, взятых с шейки матки, входит в число исследований при оценке степени онкологического риска у женщин. На протяжении нескольких лет широко при¬меняют диагностические наборы, выявляющие ДНК вируса папилломы человека 16,18, 6,11-го и ряда других онкогенных типов, которые вполне пригодны для рутинных исследований. Более точная и чувствительная диагностика возможна с применением методов молекулярной гибридизации ДНК со специфическими ДНК-зондами, соответствующими онкогенам вируса папилломы человека.

Практическое значение имеет генетическое типирование вируса папилломы человека. Этот ДНК-содержащий вирус принадлежит к семейству PAPOVA-вирусов. Известны более 80 типов вируса папилломы человека, обладающих различной тропностью к эпителию верхних дыхательных путей и аногенитальной системы, а также различным уровнем онкогенности. Среди них выделяют субтипы низкого и высокого онкогенного риска. Вирус папилломы человека низкого риска типов 6, 11, 40, 42, 43, 44 обычно ассоциированы с доброкачественными экзофитными папилломами, тогда как вирус папилломы человека высокого риска (типы 16,18,31,33, 39,45,52,56, 58) обнаруживают в 90-95% случаев преинвазивных и инвазивных форм рака шейки матки. Частота возникновения рака шейки матки у женщин, инфицированных вирусом папилломы человека высокого риска, возрастает в среднем в 30 раз по сравнению с незараженными, поэтому данный контингент обследуемых требует пристального мониторинга, особенно в группах среднего возраста.

Значительную актуальность приобретает обнаружение онкогенных вирусов папилломы человека, интегрированных в геном инфицированных клеток. Если вирус существует в эписомной (внехромосомной) форме, инфекция может с годами прекратиться. При интеграции же вирусного генома в хромосомы эпителиальных клеток и персистенции инфекций в возрасте после 40 лет резко возрастает опасность злокачественного перерождения и развития ракового заболевания. В патогенетическом аспекте наиболее важна диагностика ранних генов Е6 и Е7 в геноме вирусов высокого риска (типы 16, 18, 31 и др.), которые связаны с персистенцией ВПЧ-инфекции и ее осложнениями и выявляются во всех случаях рака шейки матки, так как, по современным данным, подавляют действие гена р53 — ключевого антионкогена. Описан ряд ПЦР-методик генотипирования вируса папилломы человека и экспрессии генов-интеграции в геном. Используемые отечественными авторами аналитические подходы не менее чувствительны и специфичны, чем стандартная методика (НСА-1) для выявления субтипов вируса папилломы человека при различных клинических формах дисплазии шейки матки. Они в основном основаны на методах гибридизации РНК или ДНК вируса папилломы человека с Е7-специфичными зондами.

Кроме вариабельности генов Е6 и Е7 вируса папилломы человека, изучается и изменчивость гена Е2 — ингибитора транскрипции £6, Е7. При этом сравнительная оценка интенсивности геноспецифических сигналов Е2 и Е6 позволяет ориентировочно оценить статус интегрированности вируса папилломы человека в геном инфицированных клеток.

ДЕРМАТОЛОГИЯ
Совершенствование способов диагностики и контроля лечения грибковых инфекций (микозов) имеет большое значение в связи с высокой частотой заболеваемости среди населения всех возрастных групп.

Дифференциальная диагностика грибковых поражений кожи и ногтей имеет особое значение в связи с различиями схем лечения при микозах различного генеза. Классическая симптоматика микозов обычно дает возможность диагностировать заболевание по клиническим признакам. Однако во многих случаях симптомы болезни бывают слабовыражены, особенно в начальной стадии заболевания или после курса лечения. Микроскопия исследуемых образцов кожи и ее придатков не всегда точна при малой интенсивности инфекции или глубоком поражении тканей. 

«Золотым стандартом» в медицинской микологии является точный и надежный способ культивирования грибов в специальных микробиологических средах. Его недостаток — большая длительность культивирования (до 4 нед) и в ряде случаев отсутствие роста гриба на фоне проводимого лечения.

Полимерная цепная реакция ДНК позволяет проводить точную и быструю диагностику трихофитии, а также кандидоза и аспергиллеза. По некоторым данным, ДНК-диагностика патогенных грибов в образцах кожи или ногтевых пластинок возможна в течение 1-2 сут после получения клинического материала.

ГЕМАТОЛОГИЯ И ОНКОЛОГИЯ
Общеизвестно, что интенсивная цитостатическая терапия наряду с противоопухолевым эффектом оказывает выраженное иммунодепрессивное действие. В связи с этим у больных необходимо регулярно контролировать наличие системных или локальных инфекций, прежде всего вирусной природы. Так, инфекция цитомегаловирусом или парвовирусом В19 может вызвать выраженное подавление гемопоэза. Вирус Эпштейна-Барр иногда сопутствует возникновению лимфом. Это особенно важно при использовании препаратов, подавляющих иммунитет (например, циклоспорина) после пересадки костного мозга. Кроме того, после многократных трансфузий эритроцитов или тромбоцитов больных нужно периодически проверять на наличие вирусов гепатитов В и С в плазме крови.

НЕВРОЛОГИЯ
В неврологической практике часто возникают вопросы дифференциальной диагностики энцефалитов и менингитов, а также задачи исключения нейроинфекций у больных с неврологическими заболеваниями. В этом случае стоит задача выявления вирусных инфекций (или их активации). Известно, что многие вирусы группы герпеса являются нейротропными. Так, цитомегаловирус, вирусы простого герпеса, опоясывающего лишая и др. могут десятилетиями персистировать в организме без особых клинических симптомов. Нарастание титров специфических антител класса IgM в сочетании с соответствующей клинической картиной и положительной ПЦР-реакцией на данный вирус ставит вопрос о проведении антивирусной терапии. Именно поэтому наиболее востребованными в неврологической клинике являются полимерная цепная реакция ДНК цитомегаловируса, простого герпеса, вируса Эпштейна-Барр, а также Herpes zoster (опоясывающего лишая). В ряде случаев требуется определение ДНК вируса герпеса VI типа, который является вероятной причиной синдрома хронической усталости и может вызывать пневмонии. Кроме того, в сомнительных случаях необходимо исключение хламидийной инфекции и токсоплазмоза у больных. Особое значение (при соответствующем анамнезе) имеет детекция ДНК боррелий — трепонем, переносимых клещами и вызывающих эндемичный клещевой боррелиоз с кожной и неврологической симптоматикой. Оптимальный вариант - проведение серологических исследований (выявление специфических антител, особенно нарастания титра антител класса IgM) с применением ПЦР-диагностики в качестве уточняющего метода.

При ряде демиелинизирующих заболеваний (например, рассеянном склерозе) клиническая картина может быть сходной с таковой при подострых и хронических иейроинфекциях. В этих ситуациях в целях дифференциальной диагностики проводят ПЦР-исследование на наличие вирусов группы герпеса и боррелий в спинномозговой жидкости.

ФТИЗИАТРИЯ И ПУЛЬМОНОЛОГИЯ
Вопросы своевременной диагностики туберкулеза стали очень актуальны в последние годы в связи с ростом заболеваемости. Безусловно, «золотым стандартом» во фтизиатрии является серологическая и бактериологическая диагностика. 

ПЦР-диагностику туберкулеза применяют в качестве подтверждающего метода выявления туберкулеза, особенно при внелегочной локализации очагов поражения. Имеется значительный выбор коммерческих тест-систем для выявления ДНК Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis и комплексной диагностики этих видов.

Использование полимерной цепной реакции с детекцией результатов в реальном времени позволяет проводить высокочувствительное исследование как в специализированном, так и в общелечебном учреждении уже на первичном этапе. Возможность количественной оценки позволяет своевременно делать заключение о степени эпидемической опасности пациента. Кроме того, исследование парных образцов или сравнение материала до и после начала курса лечения дает возможность контролировать эффективность противотуберкулезной терапии.

В последние годы появились методы генной диагностики штаммов микобактерий, резистентных к противотуберкулезным препаратам. В частности, устойчивость палочки Коха к изониазиду или рифампицину связана с мутациями микробных генов. Для выявления «генов резистентности» необходимо вырастить чистую культуру туберкулезных бактерий от данного больного. Из бактерий выделяют ДНК и подвергают амплификации (в варианте мультиплексной полимерной цепной реакции) с целью получить сегменты генов, которые могут содержать эти мутации. Затем эти продукты полимерной цепной реакции дополнительно подвергают гибридизации на носителях (биочипах) с набором ДНК- зондов, специфичных к искомым мутациям. Положительный результат гибридизации свидетельствует о наличии мутации, вызывающей устойчивость к определенному препарату, в связи с чем больному следует назначить другой препарат.

Выявление патогенных бактерий в мокроте, бронхоальвеолярном лаваже и других биологических материалах при неспецифических бронхолегочных заболеваниях (бронхитах, пневмониях) обычно проводят стандартными бактериологическими и иммунологическими методами. Однако при подозрении на вирусные инфекции можно и нужно проводить ПЦР-диагностику (например, на вирусы гриппа, парагриппа, респираторно-синцитиального вируса и др.). Особое значение имеет своевременная диагностика патогенных грибов, в частности рода Asper&llus, Candida, Мисог и др., у маленьких детей, пациентов пожилого возраста и больных с подавленным иммунитетом (например, после интенсивной цитостатической терапии при онкологических заболеваниях). Здесь методы полимерной цепной реакции ДНК по скорости выполнения, точности и специфичности диагностики существенно превосходят обычные способы исследования, применяемые в микологии (микроскопию, культивирование, определение специфических галактоманнанов в плазме крови и т. д.).

ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИЯ И ГЕПАТОЛОГИЯ
При выявлении наиболее частых патогенных микроорганизмов желудочно-кишечного тракта доминируют классические бактериологические методы. Это касается стандартных способов диагностики колибактериоза, сальмонеллеза, кампилобактериоза, основанных на культивировании микроорганизмов, выявлении микробных антигенов и оценке титров специфических антител. ПЦР-диагностику инфекционных заболеваний кишечника применяют нечасто, например для диагностики патогенных грибов, анаэробных бактерий или вирусных заболеваний (в частности, энтеровирусной инфекции). Определение генных вариантов микроорганизмов можно проводить в целях выявления особо патогенных генотипов (например, стрептококка, Escherichia coli и др.). В последние годы разрабатываются методы выявления мутаций, ведущих к лекарственной резистентности микробов к специфической химиотерапии. Сейчас доступны отечественные тест-системы для ПЦР-диагностики генов устойчивости к тетрациклину и эритромицину в популяциях уреаплазмы. Выявление генов резистентности следует проводить в чистых культурах микроорганизмов, что значительно увеличивает продолжительность и повышает стоимость исследования.

Существенное значение генная диагностика имеет при выявлении Я. pylori. Прямое обнаружение бактериальной ДНК в локальных пробах и слюне является фактором повышенного риска язвенной болезни желудка и ее осложнений. При этом необходимо определять патогенные штаммы этого микроорганизма (позитивные по cag, иге, vac и ряду других генов). Повышенная патогенность микроорганизмов связана с наличием у них специфических факторов, которыми могут быть клеточные токсины, ферменты, разрушающие окружающие ткани, белки, подавляющие иммунный ответ, и др. Выработка этих факторов контролируется соответствующими генами, которые часто образуют в геноме так называемые островки патогенности.

Наиболее важным приложением генной диагностики в гепатологии является детекция вирусных гепатитов. Вирусы гепатитов, способных вызывать поражение печени, относятся к различным семействам, имеют разные биологические свойства. Тактика лечения заболевания будет значительно отличаться в зависимости от этиологии. Таким образом, адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов является наиболее значимой задачей, решение которой невозможно без использования современных молекулярно-биологических методов, одним из которых является полимерная цепная реакция.

Полимерная цепная реакция используют для обследования контактных людей и более раннего выявления заболевших гепатитом А в очагах инфекции, так как РНК вируса гепатита А появляется в крови больного с гепатитом А гораздо раньше, чем антитела.

Полимерая цепная реакция в диагностике гепатита В применяется:
• для качественного обнаружения ДНК;
• ранней диагностики острого гепатита В - ДНК вируса гепатита В обнаруживают в крови больного с гепатитом В в среднем на 20 дней раньше, чем HBsAg;
• количественной оценки вирусной нагрузки;
• выявления мутантных штаммов вируса гепатита В;
• выявления скрытых форм вирусного гепатита В;
• диагностики хронического гепатита В;
• контроля эффективности противовирусной терапии.

Полимерная цепная реакция в диагностике гепатита С позволяет:
• установить факт инфицированности гепатитом С;
• установить показания к противовирусному лечению;
• выбрать оптимальную схему лечения;
• оценить эффективность проводимого лечения.

Первичная диагностика гепатита С традиционно основана на выявлении специфических антигенов и антител. Однако от момента инфекции до выработки антител проходит значительное время (серонегативное окно). Обнаружение вирусной РНК в плазме больных на ранних этапах инфекции - важный критерий диагноза. Особую роль играет эпидемиологическая опасность гепатита С, что диктует необходимость ПЦР-скрининга в группах высокого риска (в частности, у больных при многократных гемотрансфузиях, а также среди «шприцевых» наркоманов).

Вирус гепатита С обладает значительной генетической вариабельностью. В ходе генных мутаций возникают варианты с измененным антигенным составом, что затрудняет серологическую диагностику. Именно поэтому детекция вирусной РНК методом полимерной цепной реакции является единственным методом ранней диагностики этого заболевания.

Когда решается вопрос о терапии вируса гепатита С и ее длительности, прогностически благоприятными факторами считаются молодой возраст больного, низкий уровень РНК вируса гепатита С в плазме крови (менее 104 генокопий в 1 мл плазмы), а также определенные генотипы вируса (2 или 3). Генотипирование вирума гепатита С у ПЦР-положительных больных проводят с образцами комплементарной ДНК, полученной из вирусной РНК методом обратной транскрипции, посредством амплификации типоспецифических участков генома. Наиболее часто в Европе встречаются 6 типов вируса, из которых в России тип является прогностически менее благоприятным в связи с более частым развитием цирроза печени и худшим ответом на антивирусную терапию.

УРОЛОГИЯ
Мочевые инфекции являются нередкой причиной развития почечной недостаточности, некоторые патогенные микроорганизмы представляют собой важный фактор возникновения мочекаменной болезни. Наиболее часто в мочевыводящих путях выявляют следующие микроорганизмы.
• Escherichia coli.
• Другие энтеробактерии (Proteus, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter).
• Pseudomonas aeruginosa.
• Enterococcus.
• Staphylococcus saprophyticus.
• Staphylococcus aureus.
• Streptococcus agalactiae (группа В) — в основном у женщин.
• Candida.

Реже встречаются такие патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, как Haemophilus influenzae, Haemophilus parainfluenzae, Blastomyces dermatitidis. Наиболее часто в клинике исследуют наличие Neisseria gonorrhoeae. Гонококк легко выявляется с помощью микроскопии и другими бактериологическими методами. ПЦР-диагностику ДНК гонококков проводят довольно часто, но ее эффективность значительно ниже ожидаемой. Причиной этого может быть ранняя антибиотикотерапия больных в высоких дозах, что резко снижает выявляемость любых патогенных микроорганизмов, чувствительных к данному антибактериальному препарату. Другим микроорганизмом, поиск которого весьма актуален, является Mycobacterium tuberculosis, в диагностике которого молекулярно-биологическая диагностика играет уточняющую роль после классических способов бактериологического исследования.

Микробные факторы уропатогенности могут лежать в основе существенных механизмов, способствующих образованию кристаллов на слизистой оболочке мочевыводящих путей и возникновению мочекаменной болезни. Так, Proteus mirabilis и Corynebacterium urealyticum вырабатывают значительные количества уреазы — фермента, расщепляющего мочевину с образованием ионов аммония, повышением щелочности мочи, что ведет к облегченному росту бактерий и образованию камней в мочевом пузыре. Доказано, что уреазопозитивные штаммы бактерий способствуют повышению pH мочи, это ведет к повышенному риску формирования оксалатных и струвитных камней. К таковым относится Proteus mirabilis, который может образовывать биопленки, особенно на поверхности мочевых катетеров. Интенсивный рост протея приводит к быстрому осаждению кальциевых конкрементов в просвете катетера и появлению потенциального источника восходящей мочевой инфекции. Уреазопозитивные штаммы Proteus mirabilis способствуют защелачиванию мочи, что создает условия для камнеобразования.

Непосредственную роль конкретных инфекционных возбудителей в процессах камнеобразования довольно сложно проследить, поскольку патогенные микроорганизмы в ходе формирования конкрементов могут находиться как на их поверхности, так и в глубине этих структур. По этой причине до сих пор не установлена роль так называемых нанобактерий (содержащих кальций частиц размерами менее 0,5 мкм), обнаруженных в составе почечных камней. Предполагалось, что нанобактерии могут играть определенную роль в камнеобразовании, так как они были связаны с формированием карбонатных отложений. Однако последующие изыскания не подтвердили эту теорию, поскольку выделенные микроорганизмы уже были известны ранее как сапрофитная флора.

Таким образом, в урологической практике имеет смысл поиск микробных маркеров, связанных с повышением щелочности мочи и риском развития камней. Поскольку многие из этих бактерий культивируются недостаточно эффективно, применение ДНК-диагностики для выявления и количественной оценки этих бактерий в моче и на слизистой оболочке является перспективным способом оценки факторов риска мочекаменной болезни и других урологических заболеваний.

СТОМАТОЛОГИЯ
Некоторые из 600 видов микроорганизмов, населяющих полость рта, играют важную роль в развитии воспалительных заболеваний зубов и десен. Так, в старших возрастных группах наличие анаэробных бактерий в поддесневой области является признаком развития пародонтита. ПЦР-диагностику этих микробов начинают применять главным образом для обоснования антимикробной терапии. Изучалась частота выявления микроорганизмов - маркеров заболеваний эмали и пародонта в различных возрастных группах российской популяции. Выявление ДНК Actinohacillus actinimycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Bacteroidesforsythus осуществляли в стандартных образцах биоматериала из ротовой полости. Всего обследованы 1985 человек в четырех городах России в пяти возрастных группах по 100 человек в каждой. Оба пола были одинаково представлены в подгруппах. Пробы забирали с поверхности языка, наддесневого и поддесневого зубного налета. Геноспецифическую полимерную цепную реакцию ДНК пародонтогенных бактерий проводили по мультиплексной методике. Как в общей выборке, так и в пределах отдельных регионов выяснилось, что частота выявления микрофлоры оказалась наиболее высокой в пробах наддесневого зубного налета и составила для апластической анемии - 46,7%, для PG - 53,75%, для BF — 40,5%. Отмечена четкая возрастная динамика выявления микроорганизмов в полости рта, начиная с группы 6-7 лет. Максимум выявления апластической анемии, BF и PG отмечался в старших возрастных группах. Полученные данные показывают достаточно высокую чувствительность ПЦР-диагностики, что дает возможность оценивать тяжесть пародонтитов и эффективность проводимого лечения.

ИММУНОЛОГИЯ
Присутствие антител к ВИЧ в крови пациента может служить только косвенным маркером ВИЧ-инфекции, поэтому применяется прямой метод диагностики. Первичную диагностику ВИЧ-1 проводят в образцах плазмы и сыворотки крови с помощью наборов для серологической диагностики, основанных на детекции специфических ВИЧ-антигенов и противовирусных антител. Важной проблемой является определение динамики патологического процесса у ВИЧ-инфицированных, в частности количества вирусных частиц в крови (так называемой вирусной нагрузки). Этот показатель определяется методами количественной полимерной цепной реакции. Проводят выделение вирусной РНК, ее обратную транскрипцию с получением комплементарной ДНК. Количество вируса в образце вычисляют по содержанию этой кДНК в реакционном объеме.

Таким образом, использование полимерная цепная реакция позволяет решить ряд актуальных задач диагностики, таких как:
• раннее выявление ВИЧ-инфекции;
• определение вирусной нагрузки; 
• обследование детей, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей;
• в качестве подтверждающего теста при сомнительных результатах иммуноблота;
• мониторинг заболевания.

Большое значение имеет анализ генов лекарственной устойчивости вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1). Известны десятки мутаций генов протеазы и ревертазы ВИЧ-1, приводящих к развитию его резистентности к терапии препаратами-ингибиторами. Это поколение лекарств составляет основу современной антиретровирусной терапии, существенно отодвигая сроки развития СПИДа и облегчая его течение. Методы диагностики этого класса мутаций ВИЧ-1, в том числе гибридизационные тесты, методы прямого секвенирования, существенно дороже обычной полимерной цепной реакции, но данное исследование целесообразно проводить до начала дорогостоящего лечения соответствующими препаратами- ингибиторами.

ИЗУЧЕНИЕ НАСЛЕДСТВЕННЫХ БОЛЕЗНЕЙ И ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЕЙ К РАЗЛИЧНЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ
Наиболее актуальным направлением использования полимерной цепной реакции в настоящее время является изучение генетики человека, а именно предрасположенностей к различным заболеваниям. По различным оценкам, в геноме человека от 3 до 10 млн SNP. Точечные нуклеотидные полиморфизмы, так же как и более крупные генетические повреждения (делеции, хромосомные аберрации), являются фактором риска развития многих заболеваний и обусловливают эффективность метаболизма различных веществ. Особенностью данных генетических перестроек является то, что они могут долгое время никак себя не проявлять, а спусковым механизмом могут стать особенности питания, беременность, прием некоторых лекарств, образ жизни и другие факторы. Таким образом, генетическая паспортизация имеет колоссальное значение не только для генетики человека, но и для практической медицины.

ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ
Среди перспектив развития метода следует отметить:
• повышение точности и достоверности анализа, которые зависят от реагентов, используемых в лаборатории (системы выделения и амплификации нуклеиновых кислот);
• расширение спектра исследований, что повысит востребованность ПЦР- метода;
• увеличение скорости проведения анализа, что позволит повысить производительность ПЦР-лаборатории;
• возможность интеграции ПЦР-оборудования в автоматизированные линии, что значительно снизит ошибки, связанные с работой персонала.

Наряду с внедрением современных технологий в клинико-диагностическую практику остро встает вопрос об обеспечении этих технологий современной нормативно-правовой базой (методическими рекомендациями, указаниями, санитарными правилами, техническим контролем, программами подготовки персонала и т. д.).

Оцените статью: (10 голосов)
3.9 5 10

Статьи из раздела Лабораторная диагностика на эту тему:
Гибридизационный анализ
Клиническое применение результатов исследования
Метод полимеразной цепной реакции
Методы молекулярной диагностики
Методы молекулярной клинической диагностики при установлении или уточнении диагноза заболевания


Новые статьи

» Стронгилоидоз
Стронгилоидоз
Стронгилоидоз - хронически протекающий геогельминтоз с преимущественным поражением ЖКТ и общими аллергическими проявлениями. Основной источник заражения стронгилоидозом - больной человек. Некоторые... перейти
» Трихинеллез
Трихинеллез
Трихинеллез у человека - это острый зооноз с природной очаговостью, протекающий с лихорадкой, мышечными болями, отеком лица, кожными высыпаниями, высокой эозинофилией, а при тяжелом т... перейти
» Энтеробиоз
Энтеробиоз
Энтеробиоз - кишечный гельминтоз, вызываемый мелкой нематодой Enterobius vermicularis, со стертым и невыраженным течением, наиболее распространенный признак которого - перианальный зуд, возникающий на... перейти
» Аскаридоз
Аскаридоз
Аскаридоз - кишечный гельминтоз, вызываемый нематодой Ascaris lumbricoides, протекающий с поражением ЖКТ, интоксикацией, аллергическими реакциями. Аскаридоз - один из самых распространенных гельмин... перейти
» Альвеококкоз
Альвеококкоз
Альвеококкоз (Alveococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепней Echinococcus multilocularis, с хроническим прогрессирующим течением, развитием в печени и других органах мн... перейти
» Эхинококкоз
Эхинококкоз
Эхинококкоз (Echinococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепня Echinococcus granulosus, характеризуемый хроническим течением и развитием преимущественно в печени, реже в л... перейти