MEDDAILY.INFO
медицинская энциклопедия
ГлавнаяКарта сайта Контакты
 

Иммунохимические методы исследования кала

фото Иммунохимические методы исследования кала
Определение концентрации специфических белков непосредственно в кале достоверно отражает патологические процессы в желудочно-кишечном тракте. Кроме того, преимущества сбора кала в том, что это неинвазивная нестрессовая процедура, легкая в исполнении, можно при необходимости ее повторить.

ХИМОТРИПСИН
Химотрипсин — фермент сериновая протеаза, которая секретируется поджелудочной железой после приема пищи. Белки пищи гидролитически расщепляются химотрипсином преимущественно по ароматическим остаткам. Незначительная часть активного фермента экскретируется с калом. В случае недостаточности поджелудочной железы секреция фермента значительно снижена. Анализ химотрипсина в кале — информативный неинвазивный параметр для оценки нарушений панкреатической функции. Преимущество данного метода в том, что с его помощью измеряют именно концентрацию, а не активность фермента. Химотрипсин характеризуется высокой стабильностью (12 дней при комнатной температуре), что сравнимо с устойчивостью панкреатической эластазы, поэтому определение химотрипсина в кале является альтернативным для теста панкреатической эластазы.

Показания:
• хронический панкреатит;
• экзокринная недостаточность поджелудочной железы.

Активность химотрипсина
Активность химотрипсина может быть измерена в образце фекалий спектрофотометрически.


Пациентам с нарушениями пищеварения часто назначают препараты с панкреатическими ферментами. В этом случае необходимо отказаться от приема подобных лекарств за 5 дней до сбора образца для анализа. Слабительные препараты также необходимо исключить в ближайшее время перед сбором образца. Ложнозаниженный результат активности химотрипсина может быть в случае диареи, низкобелковой диеты или обструктивной желтухи, тогда как ложнонормальный результат может быть по причине заместительной ферментной терапии. Очень высокие значения — показатель ферментации (брожения) или повышенной кишечной секреции (например, энтероколит).

Показание: экзокринная недостаточность поджелудочной железы.

ПАНКРЕАТИЧЕСКАЯ АМИЛАЗА
Панкреатическая амилаза, подобно липазе и эластазе, синтезируется в поджелудочной железе. При хронических панкреатитах, включая панкреатиты, вызванные алкоголизмом и травмой, амилаза снижается. В рутинной лабораторной практике панкреатическая амилаза — единственный альтернативный эластазе-1 диагностический тест в образце кала.

Показания:
• хронический панкреатит;
• эзокринная недостаточность поджелудочной железы.

ПАНКРЕАТИЧЕСКАЯ ЭЛАСТАЗА-1
Эластаза-1 — протеолитический фермент, синтезируемый исключительно поджелудочной железой.


Для нее характерны стабильность в кишечном пассаже и даже аккумуляция: концентрация эластазы в 6 раз выше в кале по сравнению с дуоденальным соком. В этом анализе используют поликлональные антитела, специфически взаимодействующие с эластазой-1. Стабильность фермента чрезвычайно высока, индивидуальная вариация довольно низкая, несмотря на ее протеолитическую активность. Таким образом, определение концентрации энзима отражает секреторную способность экзокринной ткани поджелудочной железы. Этот метод видоспецифичен и не имеет перекрестных реакций со свиным ферментом, поэтому пациентам не нужно прерывать лечение ферментными препаратами для исследования.

Показание — диагностика экзокринной недостаточности поджелудочной железы:
• при хронических панкреатитах;
• муковисцидозе;
• карциноме поджелудочной железы;
• инсулинзависимом сахарном диабете;
• синдроме Швахмана-Даймонда;
• панкреатической недостаточности другого происхождения.

АЛЬБУМИН
Альбумин является основным белком человеческой плазмы (40-60%), синтезируется печенью в зависимости от поступления белка. Наличие альбумина в кале отражает воспалительную реакцию и кишечное кровотечение.


Повышенное содержание альбумина и гемоглобина в кале находят не только при колоректальных карциномах, но также у пациентов с полипами и хроническими воспалительными заболеваниями (болезнью Крона или язвенным колитом).

Показания:
• установление источника кровотечения в нижних отделах желудочно-кишечного тракта;
• диагностика колоректальной карциномы;
• обследование пациентов группы риска;
• болезнь Крона;
• язвенный колит.

СЕКРЕТОРНЫЙ IgA
Секреторный IgA (slgA) состоит из двух мономеров IgA, соединенных J-цепью, а также секреторным компонентом. Он секретируется плазматическими клетками в lamina propria слизистых мембран. Синтез slgA не зависит от синтеза плазматического IgA, это означает, что снижение IgA в сыворотке необязательно будет сопровождаться снижением slgA. Секреторный IgA - основной иммуноглобулин слюны, слезной жидкости, молозива и грудного молока, трахеобронхиального и гастроин-тестинального секретов. Ему принадлежит главная роль в предотвращении связывания микроорганизмов со слизистой, активации альтернативного пути комплемента и воспалительных реакций. Новорожденные получают slgA из материнского молока и, таким образом, пассивно иммунизируются против кишечных инфекций.

Показания:
• оценка активности иммунной системы слизистых оболочек;
• диагностика нарушений иммунологического барьера слизистой кишечника;
• аутоиммунные заболевания.

IgA/slgA-AHTHTEflA К ТКАНЕВОЙ ТРАНСГЛУТАМИНАЗЕ, ГЛИАДИНУ
Для пациентов с целиакией характерны следующие нарушения: мальабсорбция, бесплодие, остеопороз, герпетиформный дерматит, задержка роста у детей. С целиакией ассоциированы следующие аутоиммунные заболевания: сахарный диабет, ревматоидный артрит, нефриты, неврологические нарушения, тиреоидит Хашимото/базедова болезнь и повышенный риск развития Т-клеточной лимфомы. В случае отрицательных результатов исследования сыворотки пациента на эти антитела предлагают дополнительно исследовать образцы кала.

Показания:
• аутоиммунные заболевания;
• пищевая непереносимость. 

ЭОЗИНОФИЛЬНЫЙ НЕЙРОТОКСИН (EOSINOPHIL-DERIVED NEUROTOXIN, EDN)
Для диагностики пищевой аллергии немедленного типа, дифференциации между пищевой аллергией и пищевой непереносимостью и оценки эффективности элиминационной диеты рекомендуют измерять содержание эозинофильного нейротоксина рибонуклеаза ЕРХ в кале. EDN также помогает определить целостность слизистой кишечника при воспалительных заболеваниях, карциноме кишечника, кишечных паразитозах. Классические методы диагностики аллергии (определение специфических IgE-антител и прик-тесты) имеют ограниченную ценность в случае определения пищевой аллергии. Например, нормальный уровень IgE-антител и отрицательный результат прик-теста не исключают интестинальной формы пищевой аллергии. В этом случае рекомендуют тест EDN в кале.

EDN — катионный гликопротеин, который секретируется активированными эозинофилами, обладает сильной цитотоксичностью и имеет большое значение в противовирусной защите. Он высвобождается из эозинофильных гранул в местах скопления эозинофилов: коже, легких, слизистых оболочках урогенитальной системы и желудочно- кишечного тракта, т. е. в месте встречи организма с патогеном. Аккумуляция EDN в кишечнике связана с повреждением тканей.

Тест EDN в кале может служить объективным параметром текущего клинического или субклинического хронического воспаления в желудочно-кишечном тракте. У больных с язвенным колитом и болезнью Крона уровень EDN позволяет судить об активности и прогнозе заболевания.

Преимущества:
• подтверждение пищевой аллергической реакции немедленного типа;
• неинвазивная оценка активности эозинофилов гастроинтестинального тракта;
• более специфичный тест по сравнению с измерением slgA;
• можно использовать для различных образцов — кала, сыворотки, мочи, плазмы;
• белок остается стабильным в кале в течение нескольких дней.

Ограничения: лечение глюкокортикоидами снижает количество эозинофилов и может быть причиной ложноотрицательных результатов. Лечение ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента может привести к ложнозавышенным результатам.

Показания:
• диагностика пищевой аллергической реакции немедленного типа;
• оценка эффективности элиминационной диеты;
• оценка повреждения целостности слизистой оболочки кишечника, вызванной инвазивными заболеваниями;
• кишечные паразитозы.

ЛИЗОЦИМ
Лизоцим (мурамидаза) — белок с молекулярной массой около 15 кДа, принадлежащий к группе щелочных гликозидаз. Лизоцим продуцируется гранулоцитами, моноцитами и макрофагами. Основной источник лизоцима в кале — интестинальные гранулоциты. Он может определяться в воспалительном инфильтрате в острый период болезни Крона. Также он активно секретируется мононуклеарами в просвет кишки.

Показания:
• диагностика и мониторинг болезни Крона;
• бактериальные, вирусные, аллергические и аутоиммунные воспалительные заболевания кишечника.

КАЛЬПРОТЕКТИН
Кальпротектин высвобождается из нейтрофилов и макрофагов во время их активации или гибели и вовлекается в активный воспалительный процесс. Во время воспаления стенки кишечника гранулоциты мигрируют сквозь нее, поэтому кальпротектин также можно обнаружить в кале. Фекальный кальпротектин является маркером интестинального воспаления и позволяет неинвазивно дифференцировать синдром раздраженного кишечника и воспалительные заболевания кишечника, дает возможность мониторировать течение болезни/терапию болезни Крона и язвенного колита, является потенциальным скрининговым маркером колоректальной неоплазии. Клинические аспекты синдрома раздраженного кишечника: очень распространенное заболевание (в урбанистических областях страдают 6-20% общей популяции), точный диагноз ставится на исключении других диагнозов, пациента необходимо подвергнуть более или менее агрессивным исследованиям. Определение фекального кальпротектина дает возможность получить первые результаты без радиологического и/или эндоскопического исследования, поскольку его уровень коррелирует с гистологической и эндоскопической оценкой активности болезни Крона и язвенного колита так же, как и с определением экскреции меченных изотопом индия нейтрофилов, которое считают «золотым стандартом» в оценке активности воспалительных заболеваний кишечника Но изотопный метод очень дорог, требует госпитализации пациента, к тому же из-за экспозиции радиоактивного вещества непригоден для детей и беременных. Уровень фолиевой кислоты повышается при рецидиве.

Преимущества:
• метод имеет высокую диагностическую ценность: низкая концентрация в кале означает отсутствие органического заболевания кишечника (специфичность для синдрома раздраженного кишечника — 100%). Чувствительность для болезни Крона — до 100%, специфичность — 97%. Для синдрома раздраженного кишечника. К чувствительность — 85% и специфичность - 71% (римские критерии синдрома раздраженного кишечника положительны);
• высокая стабильность фекального кальпротектина в кале в течение нескольких дней;
• неинвазивность (метод снижает количество болезненных исследований), быстрота.

Показания:
• дифференциальная диагностика болезни Крона и синдрома раздраженного кишечника;
• оценка стадии/степени воспалительных заболеваний кишечника;
• параметр мониторинга болезни Крона, язвенного колита, пациентов после удаления полипов кишечника;
• маркер бактериальной диареи.

А1 - АНТИТРИПСИН
А1 - Антитрипсин действует как первичный ингибитор эластазы полиморфно-ядерных нейтрофильных гранулоцитов (PMN-эластазы) и секретируется во время воспаления, снижая протеолитическую активность PMN-эластазы в месте воспаления. Кроме того, через образование комплекса ингибирует группу сериновых протеаз, участвующих в образовании сгустка, трипсина, химотрипсина и т. п. Таким образом, а1-антитрипсин играет важную регуляторную роль в антивоспалительном ответе. А1-Антитрипсин — линейный гликопротеин с молекулярной массой 52 кДа (394 аминокислотных остатка), со свободным цистеиновым остатком и тремя боковыми углеводными цепями. Синтезируется преимущественно в печени, а также макрофагами, моноцитами и эпителиальными клетками слизистой оболочки кишечника. А1-Антитрипсин является основным ингибитором сериновых протеаз в плазме человека. Также доказано, что фекальный а1-антитрипсин — важный маркер интестинальной потери белка и повышенной проницаемости кишечника, так как он устойчив к деградации в кишечнике за счет своей антипротеолитической активности. Кроме того, измерение концентрации фекального а1-антитрипсина используют для оценки и мониторинга хронических воспалительных заболеваний кишечника. В клинической практике оценка клиренса а1-антитрипсина (соотношение уровней а1-антитрипсина в кале и крови) предпочтительнее по сравнению с единственным определением в кале: ложнонегативные и ложноположительные результаты снижаются на 21%. Метод более чувствителен по сравнению с рутинными методами и способствует определению концентрации белка в супернатантах клеточных культур, а также успешному распознаванию как печеночной, так и кишечной формы а1-антитрипсина. Данный метод — перспективная альтернатива методу радиальной иммунодиффузии, особенно при большой потере белка. Комбинация двух типов специфических антител снижает количество ложнонегативных результатов, гарантируя надежную диагностику. Таким образом, это новый, простой в использовании и неинвазивный тест для определения интестинальной потери белка.

Показания:
• синдром потери белка через кишечник и нарушение интестинальной проницаемости;
• болезнь Крона;
• некротический энтероколит;
• воспаление вирусного, бактериального или аллергического происхождения.

Р-ДЕФЕНЗИН-2
р-Дефензины являются частью врожденного иммунитета и антимикробного иммунного барьера слизистой кишечника. Дефензины обладают антимикробной активностью в разной степени против бактерий, грибков и некоторых оболочечных вирусов. У позвоночных различают а- и р-дефензины по различиям в структуре белков. У человека известны 9 видов дефензинов эпителиального происхождения, 3 из них являются р-дефензинами. Экспрессия р-дефензинов индуцируется провоспалительными цитокинами и микроорганизмами.

Дефицит р-дефензина-2 может наблюдаться в слизистой кишечника у пациентов с болезнью Крона. Система дефензинов у таких больных неполноценна и не ограничивает инвазивный бактериальный рост, приводящий к типичным для болезни Крона инфекциям. Роль недостаточности р-дефензина-2 в патогенезе болезни Крона в настоящее время изучается. Также возможно, что некоторые пробиотические бактерии про-дуцируют р-дефензин. Показание — дифференциальная диагностика болезни Крона (снижение уровня р-дефензина-2) и язвенного колита (повышение уровня р-дефензина).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГЕНА Н. PYLORI
Helicobacter pylori считается причиной хронического гастрита В, нелекарственного язвенного дуоденита и этиологическим стимулом MALT-лимфомы желудка. Кроме того, предполагают его участие в патогенезе карциномы желудка. В западных индустриально развитых странах эпидемиология геликобактерной инфекции характеризуется линейным ростом с возрастом, а в развивающихся странах вовлечено также большое количество детей и подростков.

Существующие методы инфекции Helicobacter pylori чувствительны и высокоспецифичны, но требуют либо инвазивных образцов, либо специального оборудования. Данный метод разработан для неинвазивной диагностики инфекции Н. pylori в образцах кала и обеспечивает надежные результаты без потери чувствительности и специфичности. Тест имеет эквивалентные с уреазным дыхательным тестом чувствительность и специфичность.

Показания:
• диагностика инфекции Helicobacter pylori;
• контроль эффективности антигеликобактерной терапии.

КОМПЛЕКС «ГЕМОГЛОБИН-ГАПТОГЛОБИН» (НЬ-Нр) В КАЛЕ
Свободный НЬ немедленно комплексируется с сывороточным белком гаптоглобином (Нр). Комплекс НЬ-Нр более стабилен в кишечнике по сравнению с НЬ. С помощью комбинации двух методов можно определить даже кровотечение из аденоматозных узлов/карциномы верхнего отдела гастроинтестинального тракта. Сочетание двух методов высокочувствительно для раннего обнаружения колоректальной карциномы. В отличие от других тестов определения крови в кале, этот метод не требует диетических или лекарственных ограничений, способствует определению FHb с чувствительностью, превосходящей экспресс-тесты в 100 раз, что позволяет исключить ложноотрицательные результаты. Подобранные антитела обеспечивают высокую специфичность. На результаты не влияют гемоглобин животных, миоглобин, пероксидазы животных и растений или антиоксиданты, подобные витамину С. Метод доступен в иммуноферментном и экспресс-формате.

Показания:
• анализ на скрытую кровь в кале;
• болезнь Крона, язвенный колит;
• подозрение на карциному толстого кишечника;
• полипы прямой кишки.

МИЕЛОПЕРОКСИДАЗА
Гранулы нейтрофилов содержат большое количество разных ферментов. Миелопероксидаза катализирует окисление с образованием токсичных для микро-организмов перекисных продуктов. Эффективность разрушающего бактерии действия усиливается под действием эластазы полиморфноядерных лейкоцитов. Определение миелопероксидазы в кале отражает активность болезни Крона и язвенного колита.

Показания:
• маркер воспаления желудочно-кишечного тракта;
• окислительный стресс.

ЗЛАСТАЗА ПОЛИМОРФНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ
Эластаза азурофильных гранул нейтрофилов, гликопротеин из группы сериновых протеаз. Маркер воспалительных заболеваний, может вызвать серьезные поражения ткани в месте секреции. Особенно это важно для болезни Крона, характеризующейся ростом фагоцитарной активности и повышенной секрецией эластазы полиморфнонуклеарной и других лизосомальных ферментов.

Показания:
• маркер активации болезни Крона;
• бактериальная инфекция;
• дифференциальная диагностика болезни Крона и синдрома раздраженного кишечника.

Оцените статью: (11 голосов)
4.36 5 11

Статьи из раздела Лабораторная диагностика на эту тему:
Асцитическая жидкость
Биохимическое исследование спермы
Диагностическая значимость тестовых полосок
Динамическое исследование эякулята
Иммунологическое исследование спермы


Новые статьи

» Стронгилоидоз
Стронгилоидоз
Стронгилоидоз - хронически протекающий геогельминтоз с преимущественным поражением ЖКТ и общими аллергическими проявлениями. Основной источник заражения стронгилоидозом - больной человек. Некоторые... перейти
» Трихинеллез
Трихинеллез
Трихинеллез у человека - это острый зооноз с природной очаговостью, протекающий с лихорадкой, мышечными болями, отеком лица, кожными высыпаниями, высокой эозинофилией, а при тяжелом т... перейти
» Энтеробиоз
Энтеробиоз
Энтеробиоз - кишечный гельминтоз, вызываемый мелкой нематодой Enterobius vermicularis, со стертым и невыраженным течением, наиболее распространенный признак которого - перианальный зуд, возникающий на... перейти
» Аскаридоз
Аскаридоз
Аскаридоз - кишечный гельминтоз, вызываемый нематодой Ascaris lumbricoides, протекающий с поражением ЖКТ, интоксикацией, аллергическими реакциями. Аскаридоз - один из самых распространенных гельмин... перейти
» Альвеококкоз
Альвеококкоз
Альвеококкоз (Alveococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепней Echinococcus multilocularis, с хроническим прогрессирующим течением, развитием в печени и других органах мн... перейти
» Эхинококкоз
Эхинококкоз
Эхинококкоз (Echinococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепня Echinococcus granulosus, характеризуемый хроническим течением и развитием преимущественно в печени, реже в л... перейти