MEDDAILY.INFO
медицинская энциклопедия
ГлавнаяКарта сайта Контакты
 

Микроскопическое исследование спермы

фото Микроскопическое исследование спермы
Микроскопическое исследование эякулята проводят после полного разжижения материала.

Оно включает:
• изучение в нативном препарате подвижности сперматозоидов (кинезиограмма), наличия агглютинации или агрегации;
• подсчет количества сперматозоидов, лейкоцитов и клеток сперматогенеза в камере Горяева;
• дифференциальную диагностику живых и мертвых сперматозоидов;
• изучение морфологии сперматозоидов, клеток сперматогенеза, лейкоцитов и эпителия в окрашенных препаратах;
• обнаружение в этих препаратах простейших;
• обнаружение в препаратах, окрашенных по Граму, грамотрицательных диплококков (Gn).

Согласно рекомендациям ВОЗ, микроскопическое исследование эякулята следует проводить в два этапа. На первом этапе оценивают концентрацию, подвижность и агглютинацию сперматозоидов, а также наличие других клеточных элементов. 

Исследование проводят на неокрашенных мазках простой световой микроскопией или с помощью фазово-контрастного микроскопа. На втором этапе исследование проводят на окрашенных препаратах, оценивают жизнеспособность сперматозоидов, определяют их концентрацию, проводят морфологическую классификацию и выявляют наличие антиспермальных антител.


Дополнительные исследования сперматозоидов включают: определение индексов множественных дефектов сперматозоидов, тест на гипоосмотическое набухание, посев эякулята и биохимический анализ функций придаточных половых желез.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ НАТИВНОГО ПРЕПАРАТА
На предметное стекло, предварительно согретое до температуры хранения эякулята, полуавтоматической пипеткой с наконечником разового использования наносят каплю тщательно размешанного эякулята. Для создания тонкого слоя объем капли должен быть фиксированным (10 мкл), так же как и размер покровного стекла (22x22 мм).

Под тяжестью покровного стекла эякулят равномерно и однослойно распределяется по поверхности предметного стекла, стандартная толщина слоя — около 20 мкм, что обеспечивает оптимальный обзор препарата. В приготовленном препарате между покровным и предметным стеклом не должно быть пузырьков воздуха. Стабилизация препарата происходит в течение 1 мин. Не следует сильно прижимать покровное стекло, так как при толщине препарата менее 20 мкм возможны нарушения вращательных движений сперматозоидов. Исследование следует проводить при температуре не ниже 20 °С, поддерживая температуру в помещении на постоянном уровне, иначе будут искажаться результаты оценки подвижности сперматозоидов.

Предварительная оценка сперматозоидов
Нативный препарат просматривается при малом увеличении с окуляром (уве-личение в 10 раз) или бинокуляром (в 7 раз) и объективами (в 8,10 или 20 раз) со спущенным конденсором или же при поднятом конденсоре и закрытой диафрагме.


Определяют качество приготовления нативного препарата: отсутствие пузырьков воздуха, равномерную толщину препарата. В бланке отмечают наличие агглютинации, агрегации сперматозоидов и слизи, а также присутствие эритроцитов, «круглых клеток» (лейкоцитов, клеток сперматогенеза, эпителия и др.) и элементов простаты [кристаллов спермина (Беттхера), лецитиновых зерен и амилоидных телец], а также простейших (Trichomonas urogenitalis).

Агглютинация сперматозоидов — склеивание подвижных сперматозоидов между собой головками, хвостами или головок с хвостами. В норме у практически здоровых пациентов агглютинации сперматозоидов нет. Агглютинация позволяет предположить наличие иммунологического фактора бесплодия, однако ее нельзя считать доказательством последнего.

В бланке отмечают тип агглютинации (головками, хвостами или смешанный вариант) и оценивают степень агглютина¬ции полуколичественно:
• «-» — отсутствие агглютинации;
• «+» — слабовыраженная агглютинация (в нативном препарате до 10 кучек по 4-6 сперматозоидов в каждой);
• «++» — значительная агглютинация (в препарате более 20 кучек сперматозоидов);
• «+++» — резко выраженная агглютинация (в препарате более 20 кучек, при этом в каждой более 20 сперматозоидов);
• «++++» — тяжелая степень агглютинации (при которой все подвижные сперматозоиды агглютинированы).

Агрегация (псевдоагглютинация) — хаотическое скопление неподвижных сперматозоидов, нагромождение их на комочки или тяжи слизи, клеточные элементы и детрит.


Агрегацию и агглютинацию оценивают как отдельные показатели. Слизь в нормальном эякуляте отсутствует. Обнаруживают слизь при воспалении мочеиспускательного канала, бульбоуретральных желез, простаты, простатических ходов и т. д.

При определении вязкости разжиженного эякулята слизь вытягивается из общей массы спермы в виде волокон и тяжей или густой липкой массы. При нанесении капли спермы на предметное стекло может быть обнаружена слизь в виде комочков. Происхождение слизи в нативных и окрашенных азур-эозином препаратах определяют по обнаруженным в них эпителиальным клеткам и другим клеточным элементам. Слизь, в каком бы виде она ни присутствовала в сперме, препятствует движению сперматозоидов и приводит к снижению фертильности (оплодотворяющей способности спермы).

Из предстательной железы с простатическим соком в сперму попадают липоидные, амилоидные тельца и кристаллы спермина.

Trichomonas urogenitalis — простейшее из класса жгутиковых, имеет груше-видную форму, длину 10-20 и ширину 7-10 мкм. Форма тела поддерживается скелетным образованием — аксостилем. В переднем конце тела клетки расположены ядро и пучок из четырех жгутиков. Пятый жгутик, возвратный, проходит по краю ундулирующей мембраны (складки цитоплазмы). Движение простейшего поступательно-колебательное, осуществляется в результате постоянного движения жгутиков; ундулирующая мембрана совершает волнообразные движения, препятствующие вращению клетки. Трихомонады достаточно легко распознаются в нативном препарате спермы, несмотря на активное движение сперматозоидов. Это достаточно крупные клетки, их диаметр в 1,5-3 раза больше диаметра нейтрофила. Более четко строение трихомонад можно определить в препаратах, окрашенных азур-эозином. Это клетки неправильной округлой формы. В переднем конце тела клетки расположено вытянутое, в виде косточки сливы, ядро с четкой хроматиновой структурой, коричневато-вишневого цвета. Сложность лабораторно-диагностических процедур при трихомонозе бывает связана с идентификацией нетипичных округлых и амебовидных форм простейших в клиническом материале.

ПОДСЧЕТ СПЕРМАТОЗОИДОВ (КИНЕЗИОГРАММА)
Оценка подвижности сперматозоидов и разделение их по группам — субъективный фактор. Существует несколько рекомендаций по способам определения подвижности. Ниже приведено разделение подвижности сперматозоидов в соответствии с рекомендациями ВОЗ.

Подвижность каждого сперматозоида классифицируется по категориям а, b, с, d, при этом используются следующие критерии:
• а — быстрое поступательное движение (т.е. >25 мкм/с при 37 °С и >20 мкм/с при 20 °С; 25 мкм примерно соответствуют длине пяти головок или половине длины хвоста нормального сперматозоида);
• b — медленное, вялое поступательное движение;
• с — непоступательное (колебательное или маятникообразное, манежное), скорость движения менее 5 мкм/с;
• d — неподвижные сперматозоиды.

В окуляр с десятикратным увеличением вкладывают окошко Фонио и с объективом, увеличивающим в 40 раз, подсчитывают 100 или 200 сперматозоидов. В первые 3-5 с регистрируются проходящие через поле зрения, ограниченное окошком Фонио, активные, подвижные сперматозоиды (а), в следующие 3-5 с — малоподвижные сперматозоиды с поступательным движением (b), после них отмечаются сперматозоиды с непоступательным движением (маятникообразным и манежным) (с) и, наконец, с помощью движения микровинта регистрируются лежащие на предметном стекле (на нижнем уровне препарата) неподвижные сперматозоиды (d). Препарат резко передвигают, после чего регистрируют сперматозоиды в новом поле зрения в том же порядке. Не рекомендуют изучать подвижность сперматозоидов по краю покровного стекла. Если сперматозоидов мало, подсчет проводят без окошка Фонио.

Подвижность сперматозоидов считается нормальной, если:
• не менее 50% сперматоцитов относится к категории подвижности а + b;
• не менее 25% сперматоцитов относится по подвижности к быстрым с поступательным движением (категория а).

Дискинезия — маятникообразное, или манежное, движение сперматозоидов, в норме составляет 2%. При комнатной температуре сперматозоиды сохраняют подвижность 12-24 ч, при этом в первые 2 ч подвижность их не снижается, к концу 5 ч уменьшается примерно в 2 раза.

ПРЕДВАРИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КОНЦЕНТРАЦИИ СПЕРМАТОЗОИДОВ
В рекомендациях ВОЗ предлагается проводить предварительную оценку концентрации сперматозоидов в нативном препарате. При увеличении в 400 раз диаметр поля зрения в различных микроскопах варьирует в пределах между 250 и 400 мкм, что соответствует 1-2,5 нл при толщине препарата 20 мкм. Подсчитать диаметр поля зрения можно с помощью окуляр-микрометра или по решетке счетной камеры.

Если количество сперматозоидов в поле зрения, соответствующем 1 нл, менее 15, сперму разводят теплым (37 °С) изотоническим раствором натрия хлорида 1:5; если 15-20, разводят 1:10; если 40-200 — 1:20; если более 200 — 1:50 или 1:100. Если в 1 нл присутствует очень мало сперматозоидов (всего 1-2), что соответствует 1-2х106/мл сперматозоидов, для клинических целей необходимо сделать запись о малом количестве, а для повышения их концентрации и точного подсчета провести центрифугирование (обогащение). Если количество сперматозоидов в каждом отдельном поле зрения значительно колеблется, это свидетельствует о негомогенности образца. Причиной негомогенности может быть плохое перемешивание — следует еще раз перемешать сперму. Если негомогенность сохраняется, это следствие патологической консистенции и разжижения образца, агрегации сперматозоидов в слизи или их агглютинации. Эти находки следует обязательно зафиксировать в бланке.

Нормозооспермия. У здорового мужчины в эякуляте в 1 мл содержится более 20 млн сперматозоидов. Общее количество сперматозоидов в эякуляте — более 40 млн.

Полизооспермия. Количество сперматозоидов в 1 мл эякулята превышает 150 млн.

Олигозооспермия. В 1 мл эякулята содержится менее 20 млн сперматозоидов. Количество сперматозоидов между 10 и 20 млн/мл обозначается как олигозооспермия I степени, менее 10 млн/мл — как олигозооспермия II степени.

Азооспермия — сперматозоиды при микроскопическом исследовании в нативном препарате и осадке эякулята после центрифугирования не обнаружены. Могут присутствовать клетки сперматогенеза.

Аспермия — нет эякулята. Для определения при олигозооспермии истинного количества сперматозоидов необходимо провести 2-3 контрольных подсчета с интервалом 3-4 нед.

Транзиторная и старческая олигозооспермия. У одного и того же мужчины количество сперматозоидов подвержено большим физиологическим колебаниям. У пожилых людей олигозооспермия связана с инволюцией половых желез. 

Истинную олигозооспермию могут вызвать следующие патологические процессы.
• Обструкция семявыносящих путей — разделяется на врожденную и приобретенную. Предположить обструкцию можно, если после центрифугирования спермы в осадке отсутствуют не только сперматозоиды, но и клетки сперматогенеза. К приобретенной обструкции семявыносящих путей приводят хронические воспаления верхних отделов мочеполовых путей, вызванные гонококками, хламидиями, микобактериями туберкулеза.
• Муковисцидоз — у таких больных сперма может не содержать сперматозоидов и клеток сперматогенеза, а pH эякулята может быть ниже 7,0 (кислая реакция). Патология связана с нарушением функций семявыносящих путей, причем у этих пациентов также может быть обнаружена атрезия эпидидимиса и семенных пузырьков.
• Тестикулярная дисфункция — может привести к нарушению сперматогенеза. При непосредственном поражении яичек (гонад) возникает первичный гипогонадизм. При нарушении гипоталамо-гипофизарной регуляции сперматогенеза развивается вторичный гипогонадизм.
- Первичный гипогонадизм может быть врожденным и приобретенным. Врожденный гипогонадизм обусловлен наследственными генетическими аномалиями и дефектами развития.
- Наследственные генетические аномалии: синдромы Клайнфельтера и Шерешевского-Тернера, хромосомные аберрации, мутации AZF области Y (синдром «только клетки Сертоли»), наследственные синдромы с нормальным кариотипом (синдром Нунан), низкая чувствительность к андрогенам.
- Врожденные дефекты развития: крипторхизм, врожденный анорхизм, первичная недостаточность клеток Лейдига.
- Приобретенный первичный гипогонадизм развивается при травматических или инфекционных орхитах, синдроме сдавления, варикоцеле, новообразованиях половых органов, лейкемии, злокачественной лимфоме, повреждении спинного мозга, при печеночной и почечной недостаточности, после облучения, при действии токсичных препаратов, психологических стрессах и у людей пожилого возраста. Диагностика приобретенного гипогонадизма складывается из изучения анамнестических данных, гормонального статуса и общеклинических исследований.
- Вторичный гипогонадизм вызывается нарушением регуляторной функции гипоталамогипофизарной системы. В крови у этих пациентов снижено содержание гонадотропных гормонов (гипогонадотропный гипогонадизм). Дефицит гонадотропинов может быть вызван как первичной патологией гипофиза, так и нарушением секреции гонадотропин-рилизинг-факторов гипоталамуса (GnRH). У таких пациентов в крови снижен уровень тестостерона (идиопатический гипогонадизм). К этой категории патологии относятся синдром Кальмана (врожденный дефект гипоталамуса с дефицитом GnRH), синдром Прадера-Вилли, синдром фертильных евнухов с характерным дефицитом лютеинизирующий гормон и тестостерона на фоне нормальной концентрации фолликулостимулирующего гормона.

Астенозооспермия - снижение подвижности сперматозоидов.

Подвижность сперматозоидов считается нормальной, если:
• в сумме не менее 50% сперматоцитов имеет быстрое или медленное поступательное движение (категория подвижности а + b);
• не менее 25% сперматоцитов относится по подвижности к быстрым с поступательным движением (категория а). 

Физиологические колебания подвижности
Подвижность сперматозоидов зависит от времени года и суток. Имеются сообщения, что весной подвижность сперматозоидов снижается (сезонные колебания). При наблюдении за количеством активных, подвижных сперматозоидов в течение суток было отмечено увеличение их количества во второй половине дня (суточные ритмы). Было также прослежено колебание подвижности сперматозоидов от частоты эякуляции. У пациентов с олиго- и астенозооспермией при эякуляции каждые 4-6 ч отмечалось относительное увеличение количества активных, подвижных сперматозоидов.

Астенозооспермия отмечается примерно у 50% пациентов с нарушением фертильности. Заключение о незначительной степени астенозооспермии можно сделать, если количество активных и малоподвижных сперматозоидов с поступательным движением в сумме составляет менее 50, но более 30%.

Астенозооспермию вызывают эндогенные, генетические и экзогенные факторы.
• Генетические нарушения строения жгутика.
• Энергетические нарушения, связанные с генетически обусловленными или функциональными дефектами митохондрий.
• Хронические воспалительные заболевания.
• Бактериоспермия.
• Экзогенные токсические факторы.

Хронигеские воспалительные заболевания. Подвижными сперматозоиды становятся в процессе созревания в придатке яичка. Их подвижность меняется по мере продвижения вдоль эпидидимиса. Созревание сперматозоидов обусловлено андроген-зависимыми факторами, которые вырабатывает эпителий эпидидимиса. Эпидидимиты различной этиологии вызывают снижение подвижности сперматозоидов. Астенозооспермия возникает в результате нарушения секреторной функции эпителия эпидидимиса. В период между эякуляциями каудальный отдел эпидидимиса является местом хранения зрелых сперматозоидов, при его воспалении интоксикация поражает сперматозоиды и приводит к астенозооспермии и увеличению количества мертвых клеток.

Бактериоспермия. Некоторые микроорганизмы приводят к снижению подвижности сперматозоидов, вызывая их агглютинацию и/или адгезию. Этот процесс зависит от концентрации бактерий в сперме. Так, in vitro Е. coli значительно снижает подвижность сперматозоидов в концентрации 104/мл.

Экзогенные и токсигеские факторы. Исследование следует проводить при температуре не ниже 20 °С, поддерживая ее в помещении на постоянном уровне, иначе будут искажаться результаты оценки подвижности сперматозоидов по категориям. Подвижность сперматозоидов снижается при действии электро-магнитных полей, солей тяжелых металлов, свинца, наркотических препаратов, накоплении в сперме кадмия. Экспериментально доказано, что у сперматозоидов, помещенных в магнитное поле, снижается подвижность из-за изменения формы жгутика. По-видимому, действие экзогенных факторов неспецифическое и прямо или косвенно влияет на структуру компонентов жгутиков. Так, у наркоманов были обнаружены значительные изменения микротрубочек аксонемы жгутиков, напоминающие подобные при синдроме Картагенера (сперматозоиды живые, но неподвижные).

Оцените статью: (9 голосов)
3.89 5 9

Статьи из раздела Лабораторная диагностика на эту тему:
Асцитическая жидкость
Биохимическое исследование спермы
Диагностическая значимость тестовых полосок
Динамическое исследование эякулята
Иммунологическое исследование спермы


Новые статьи

» Стронгилоидоз
Стронгилоидоз
Стронгилоидоз - хронически протекающий геогельминтоз с преимущественным поражением ЖКТ и общими аллергическими проявлениями. Основной источник заражения стронгилоидозом - больной человек. Некоторые... перейти
» Трихинеллез
Трихинеллез
Трихинеллез у человека - это острый зооноз с природной очаговостью, протекающий с лихорадкой, мышечными болями, отеком лица, кожными высыпаниями, высокой эозинофилией, а при тяжелом т... перейти
» Энтеробиоз
Энтеробиоз
Энтеробиоз - кишечный гельминтоз, вызываемый мелкой нематодой Enterobius vermicularis, со стертым и невыраженным течением, наиболее распространенный признак которого - перианальный зуд, возникающий на... перейти
» Аскаридоз
Аскаридоз
Аскаридоз - кишечный гельминтоз, вызываемый нематодой Ascaris lumbricoides, протекающий с поражением ЖКТ, интоксикацией, аллергическими реакциями. Аскаридоз - один из самых распространенных гельмин... перейти
» Альвеококкоз
Альвеококкоз
Альвеококкоз (Alveococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепней Echinococcus multilocularis, с хроническим прогрессирующим течением, развитием в печени и других органах мн... перейти
» Эхинококкоз
Эхинококкоз
Эхинококкоз (Echinococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепня Echinococcus granulosus, характеризуемый хроническим течением и развитием преимущественно в печени, реже в л... перейти