MEDDAILY.INFO
медицинская энциклопедия
ГлавнаяКарта сайта Контакты
 

Проточная цитофлюориметрия

фото Проточная цитофлюориметрия
Лазерная проточная цитофлюориметрия — современная технология быстрой оценки частиц или клеток по определенным параметрам в процессе их продвижения в потоке жидкости. В основе проточной цитофлюориметрии лежат фотометрические и флюоресцентные измерения отдельных клеток, пересекающих одна за другой в потоке жидкости лазерный луч монохроматического света.

Проточная цитофлюориметрия играет ключевую роль в онкогематологии. Ее используют в целях диагностики и мониторирования опухолевой популяции при острых лейкозах и лимфопролиферативных заболеваниях, прогноза, подсчета абсолютного количества стволовых гемопоэтических клеток, используемых для последующей аутотрансплантации, диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии.

Широкое внедрение моноклональных антител в лабораторную практику позволило детально изучить антигенный состав поверхности нормальных лимфоцитов и миелоидных клеток человека на различных стадиях дифференцировки. На основе концепции соответствия фенотипа злокачественной клетки фенотипу нормального клеточного аналога на каждом уровне дифференцировки представилось возможным выделить ряд иммунологических вариантов (фенотипов), определяющих клеточную природу лейкозов, уровень блока дифференцировки клетки в лейкемической популяции.


В большинстве случаев острых лейкозов бласты имеют иммунофенотип, сравнимый с нормальными гемопоэтическими клетками аналогичных стадий дифференцировки. При остром лимфобластном лейкозе и остром миелобластном лейкозе бластные клетки рассматриваются как злокачественные аналоги нормальных клеток на ранних стадиях лимфо- и миелопоэза. Таким образом, по набору мембранных и цитоплазматических антигенов можно установить линейную принадлежность, стадию дифференцировки и функциональное состояние клетки.

Выделяют:
• линейно-неограниченные (нерестриктированные) антигены — их экспрессия не ограничена одной клеточной линией (CD34, CD38, HLA-DR, TdT);
• линейно-ассоциированные (линейно-специфические) антигены — специфически экспрессируются на некоторых линиях миелоидной (CD13, CD33, CD117, CD65, МПО, CD14, CD15, CD41, CD42, CD61 и т. д.) или лимфоидной (CD19, CD22, clg, slg, CD5, CD3 и т. д.) дифференцировки; 
• дифференцировочные антигены — отражают стадии дифференцировки клеток (цитоплазматический IgM, легкие цепи Ig, CD34, CD10, CDla);
• активационные антигены — отражают активацию клеток (CD25, CD38, HLA- DR и т. д.).

Дифференцировочные антигены можно обнаружить на злокачественных клетках в комбинациях, которые очень редко встречаются или не выявляются в нормальном костном мозге.


В определении таких комбинаций может помочь иммунофенотипирование с использованием трех-, четырех-, шестицветного флю-оресцентного анализа. Таким образом, лейкемические клетки можно отличить от их нормальных аналогов по ряду критериев.

К основным типам аберрантности фенотипа лейкозных клеток относятся:
• коэкспрессия антигенов нескольких линий, т. е. лимфоидных маркеров при остром миелобластном лейкозе или миелоидных маркеров при остром лимфобластном лейкозе:
• асинхронная экспрессия антигена — одновременная экспрессия «раннего» и «позднего» антигенов, которые в норме находятся на разных этапах дифференцировки клеток, например CD34 и CD15, CD15 и CD117;
• сверхэкспрессия антигена — плотность распределения антигенов на лейкозной клетке больше, чем на нормальной клетке костного мозга (например, гиперэкспрессия CD10 при остром лимфобластном лийкозе);
• отсутствие или низкий уровень экспрессии антигена, характерного для данной стадии дифференцировки, — потеря клеткой ряда поверхностных антигенов, например утрата CD33 наблюдается в 21% случаев острого миелобластного лейкоза;
• фенотипический профиль, практически не встречаемый в норме.

Аберрантность экспрессии антигенов отражает генетические изменения, лежащие в основе опухолевого перерождения клетки, позволяя выявлять атипичные клетки даже при относительно небольшом их содержании в образце.


Подобный иммунофенотип лейкозной клетки позволяет проводить мониторинг остаточной опухолевой популяции в процессе химиотерапии.

В области исследования лимфопролиферативных заболеваний проточную цитометрию используют для классификации на Т-, В- и НК-клеточные заболевания, а также для их дифференциальной диагностики. Проточная цитофлюориметрия позволяет исследовать антигены, имеющие прогностическое значение, например CD38, ZAP-70, CD31 при В-клеточном хроническом лимфолейкозе, и, таким образом, определять прогноз заболевания. Широкое использование в клинической практике моноклональных антител (мабтеры, кэмпаса и др.) значительно улучшило результаты лечения больных с индолентными лимфомами. Для успешного их применения необходимо до начала терапии исследовать степень экспрессии антигенов на соответствующих клетках-мишенях (например, CD20 или CD52 при использовании соответственно мабтеры и кэмпаса). В динамике лечения, используя метод проточной цитофлюориметрии, можно проводить мониторинг остаточной популяции опухолевых клеток. На сегодняшний день разработаны стандартные протоколы оценки минимальной остаточной болезни при хроническом лимфолейкозе, острый лимфобластный лекйоз у детей, которые позволяют клиницистам принять решение о продлении или прекращении соответствующего лечения.

Подсчет гемопоэтических стволовых клеток на основании идентификации антигена CD34 широко используется в клинической гематологии. В многочисленных исследованиях продемонстрировано, что они обеспечивают постепенное восстановление костного мозга после интенсивной химиотерапии. Проточная цитофлюорметрия позволяет не только подсчитать абсолютное количество гемопоэтических стволовых клеток, но и после мобилизации их из костного мозга ростовыми факторами определить срок сбора в периферической крови. В клинических исследованиях показано, что для успешного восстановления костного мозга после химиотерапии требуется не менее 2х106/кг СБ34+-клеток периферической крови. 

Таким образом, широкое использование проточной цитофлюориметрии в онкогематологии привело к качественно новой диагностике лейкозов и лимфом, а также к разработке новых подходов в оценке эффективности лечения и мониторинга минимальной остаточной болезни, определяющей дальнейшую тактику ведения больных.



Новые статьи

» Стронгилоидоз
Стронгилоидоз
Стронгилоидоз - хронически протекающий геогельминтоз с преимущественным поражением ЖКТ и общими аллергическими проявлениями. Основной источник заражения стронгилоидозом - больной человек. Некоторые... перейти
» Трихинеллез
Трихинеллез
Трихинеллез у человека - это острый зооноз с природной очаговостью, протекающий с лихорадкой, мышечными болями, отеком лица, кожными высыпаниями, высокой эозинофилией, а при тяжелом т... перейти
» Энтеробиоз
Энтеробиоз
Энтеробиоз - кишечный гельминтоз, вызываемый мелкой нематодой Enterobius vermicularis, со стертым и невыраженным течением, наиболее распространенный признак которого - перианальный зуд, возникающий на... перейти
» Аскаридоз
Аскаридоз
Аскаридоз - кишечный гельминтоз, вызываемый нематодой Ascaris lumbricoides, протекающий с поражением ЖКТ, интоксикацией, аллергическими реакциями. Аскаридоз - один из самых распространенных гельмин... перейти
» Альвеококкоз
Альвеококкоз
Альвеококкоз (Alveococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепней Echinococcus multilocularis, с хроническим прогрессирующим течением, развитием в печени и других органах мн... перейти
» Эхинококкоз
Эхинококкоз
Эхинококкоз (Echinococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепня Echinococcus granulosus, характеризуемый хроническим течением и развитием преимущественно в печени, реже в л... перейти