MEDDAILY.INFO
медицинская энциклопедия
ГлавнаяКарта сайта Контакты
 

Плазменное звено гемостаза

фото Плазменное звено гемостаза
Принципы клоттинговых и хромогенных методов
Для оценки плазменной системы гемостаза в клинико-диагностической лаборатории коагулологическое исследование выполняют в основном двумя методами — хромогенным и клотинговым.

Хромогенные методы основаны на образовании окрашенных продуктов. Принцип реакции с применением хромогенных субстратов в коагулологии состоит в том, что синтетический пептид (или хромогенный субстрат) добавляют в реакционную пробу, он взаимодействует со специфическим ферментом (например, фактором свертывания), краситель высвобождается, и его количество измеряют фотометрически. По количеству высвободившегося красителя (интенсивности окраски) определяют активность искомого фактора. Фотометрию проводят в интервале длин волн 405-410 нм на фотометрах. Выполнение таких исследований ручными методами без соответствующего оборудования невозможно.

Наиболее распространенный тест с применением хромогенных субстратов — определение активности антитромбина III, плазминогена, протеина С, анти-Ха, активности гепарина. Существуют диагностические наборы для научно-исследовательской практики на определение ингибитора активатора плазминогена, ингибитора плазмина, растворимого фибриногена, фактора ХНа, хемотрипсина, фактора X, гранулоцитарной эластазы, активности ингибитора калликреина, калликреина плазмы и его активатора, трипсина и урокиназы.

Методы исследования с использованием хромогенных субстратов имеют ограничения вследствие:
• отсутствия субстратов для определения всех факторов свертывания;
• относительной сложности и трудоемкости выполнения методик;
• низкой селективности синтетических хромогенных субстратов (могут реагировать с другими протеазами плазмы крови);
• влияния большого количества внешних факторов на протекание реакции;
• высокой стоимости анализа.

Тем не менее определение активности фактора свертывания более значимо, чем измерение его количества или массы.

Клоттинговые (от англ.


clot — сгусток) методы основаны на измерении промежутка времени с момента внесения реагента, запускающего ферментативный процесс свертывания плазмы (каскад реакций), до момента коагуляции — образования фибринового сгустка (нитей фибрина). В зависимости от присутствия в реакционной пробе тех или иных активаторов или ингибиторов, добавляемых при исследовании, оценивают активность того или иного фактора свертывания либо отдельных звеньев (путей) плазменного гемостаза.

Клоттинговые методы наиболее распространены, поскольку характеризуются:
• простотой и легкостью выполнения;
• определенной стандартизированностью;
• коротким временем выполнения;
• доступностью специализированных наборов реагентов;
• низкими затратами на исследование;
• моделированием физиологических механизмов образования сгустка (тромба).

При скрининговых исследованиях системы гемостаза применяют клоттинговые методы — протромбиновый тест, концентрация фибриногена, активированное частичное тромбопластиновое время, тромбиновое время, а также при расширенном обследовании — активность факторов II, V, VII, VIII, IX, X, XI, XII, активность антитромбина, активность системы протеина С.

Основными элементами коагулологического анализа являются:
• дозирование плазмы;
• дозирование реагентов;
• измерение времени образования фибринового сгустка (для клоттинговых методов) или фотометрирование (для хромогенных методов).

Для измерения времени образования сгустка в клоттинговых тестах используют приборы, называемые коагулометрами, анализаторами свертывания крови или анализаторами показателей гемостаза.


Они бывают полуавтоматическими и автоматическими. В автоматических коагулометрах все элементы аналитического процесса выполняются без участия человека. В полуавтоматических анализаторах дозирование плазмы и реагентов осуществляет лаборант, а измерение времени образования сгустка и расчеты результатов анализа выполняет прибор.

В некоторых лабораториях исследования системы гемостаза выполняют ручными методами с применением водяной бани (термостата с прозрачными стенками), все элементы аналитического процесса выполняет вручную лаборант. Ручные методы не позволяют обеспечить современные требования, предъявляемые к точности биомедицинских измерений, об этом свидетельствует статистика Федеральной системы внешней оценки качества. В связи с индивидуальными, неповторяющимися свойствами глаза визуальные измерения субъективны и характеризуются относительно большим количеством ошибок. Человеческий глаз быстро устает, поэтому при выполнении множества серий точность измерения непрерывно уменьшается. Кроме того, производительность таких исследований крайне мала.

Основополагающим различием в принципе действия коагулометров считается механизм, предназначенный для регистрации времени образования сгустка фибрина в тестируемой смеси.


В основе регистрации момента выпадения сгустка в коагулометрах используется несколько принципов: механический, оптический (турбидиметрический или нефелометрический), оптико-механический (комбинация оптического и механического методов). На основе этого различия выделяют оптические, механические и оптико-механические типы коагулометров.

В коагулометрах с механическим принципом регистрации система детекции образования сгустка основана на слежении за изменением движения металлического предмета внутри измерительной кюветы. За длительность коагуляции исследуемой пробы принимается промежуток времени с момента введения в пробу реагенткоагулянта и начала движения шарика до момента его остановки образовавшимся в ходе реакции сгустком. Анализаторы с механическим принципом регистрации: Thrombostat 2 (Behnk Elektronik, Германия), CL4 (Behnk Elektronik, Германия), STart 4 (Roche Diagnostics, Швейцария). Коагулометры с механическим принципом регистрации сгустка характеризуются высокой надежностью и простотой в обслуживании. Неоспоримым преимуществом таких коагулометров считается возможность исследования капиллярной крови, что остается актуальным в педиатрической практике и при массовом скрининговом обследовании. Однако при регистрации времени свертывания в крови ряда больных точность такого исследования существенно ниже, чем при определении времени свертывания в плазме, так как оказывает влияние величина гематокрита. В коагулометрах с механическим принципом регистрации сгустка отсутствует автоматический запуск отсчета времени измерения при внесении стартового реагента (функция автостарта). Для запуска реакции необходим дополнительный дозатор (стартовая пипетка), соединяемый с коагулометром с помощью кабеля. Кабель снижает удобство эксплуатации. Основные проблемы применения коагулометров с механическим методом регистрации связаны с низкой плотностью образующегося сгустка при различных видах дисфибриногенемий или малых количествах фибриногена в пробе. В этих случаях, например при гепаринотерапии (концентрация фибриногена — менее 0,7 г/л), образовавшийся неплотный сгусток часто не может сразу остановить шарик, результаты получаются плоховоспроизводимыми.

В коагулометрах с оптическим принципом регистрации фибринового сгустка момент свертывания крови определяется по резкому изменению светопропускания (турбидиметрия) или рассеивания (нефелометрия) реакционной смеси на запро-граммированную величину. За длительность коагуляции исследуемой пробы принимается промежуток времени с момента введения в пробу коагулянта до момента резкого изменения оптических свойств пробы при образовании нитей фибрина. Обычно в оптических коагулометрах в измерительной кювете используется мешалка, с помощью которой достигается гомогенность перемешивания пробы и реагента, что способствует хорошей повторяемости измерений. Основным преимуществом оптических систем измерения считается высокая чувствительность, характеризуемая способностью регистрировать образование неплотного сгустка, что бывает при приеме пациентами антикоагулянтов, а также в случаях коагулопатий (при низких концентрациях фибриногена, вплоть до 0,5-0,6 г/л). Почти у всех коагулометров с оптическим типом регистрации старт времени коагуляции происходит автоматически в ответ на изменение оптической плотности после добавления стартового реагента. Оптические системы имеют недостаток — требуется применение оптически прозрачных реактивов, они не позволяют проводить исследования с цельной кровью.

Оптико-механический принцип регистрации образования фибринового сгустка делает коагулометры универсальными: их можно использовать при работе как с цельной кровью, так и с плазмой в различных разведениях и с применением любых реактивов, в том числе непрозрачных. Существуют автоматические анализаторы, способные выполнять как клоттинговые, так и хромогенные исследования. Широкое применение таких приборов сдерживается нецелесообразностью их применения в мелких и средних лабораториях.

С каждым годом растет количество людей, принимающих оральные антикоагулянты. Принимать антикоагулянты приходится в течение длительного времени. Сложности, связанные с эффективным подбором дозы, индивидуальной переносимостью препаратов, влиянием лекарственных средств, некоторых продуктов питания на свертывание, требуют частого измерения международного нормализованного соотношения. Для решения этой задачи существуют портативные коагулологические анализаторы — диагностика в месте наблюдения или у постели больного, или так называемые МНО-детекторы — устройства, позволяющие осуществлять контроль международного нормализованного соотношения в домашних условиях.

Наиболее частые и распространенные технические ошибки, возникающие при выполнении коагулологического анализа:
• неправильное взятие проб крови, при котором уже произошла активация процесса свертывания;
• неправильное соотношение объемов крови и антикоагулянта;
• неправильный выбор антикоагулянта (подходит только цитрат натрия 3,8% или 0,0025 М раствор);
• попадание в пробу гепарина;
• неправильная температура термостатирования при проведении клоттинговых и хромогенных тестов;
• использование несиликонизированной стеклянной посуды или многократное использование пластиковой одноразовой посуды (активация свертывания);
• использование для мытья посуды детергентов, влияющих на свертывание плазмы.

Оцените статью: (10 голосов)
3.4 5 10

Статьи из раздела Лабораторная диагностика на эту тему:
Методы исследования коагуляционного гемостаза. Часть 1
Методы исследования коагуляционного гемостаза. Часть 2
Основы функционирования системы гемостаза
Преаналитический этап исследований гемостаза
Тромбоцитарный компонент гемостаза


Новые статьи

» Стронгилоидоз
Стронгилоидоз
Стронгилоидоз - хронически протекающий геогельминтоз с преимущественным поражением ЖКТ и общими аллергическими проявлениями. Основной источник заражения стронгилоидозом - больной человек. Некоторые... перейти
» Трихинеллез
Трихинеллез
Трихинеллез у человека - это острый зооноз с природной очаговостью, протекающий с лихорадкой, мышечными болями, отеком лица, кожными высыпаниями, высокой эозинофилией, а при тяжелом т... перейти
» Энтеробиоз
Энтеробиоз
Энтеробиоз - кишечный гельминтоз, вызываемый мелкой нематодой Enterobius vermicularis, со стертым и невыраженным течением, наиболее распространенный признак которого - перианальный зуд, возникающий на... перейти
» Аскаридоз
Аскаридоз
Аскаридоз - кишечный гельминтоз, вызываемый нематодой Ascaris lumbricoides, протекающий с поражением ЖКТ, интоксикацией, аллергическими реакциями. Аскаридоз - один из самых распространенных гельмин... перейти
» Альвеококкоз
Альвеококкоз
Альвеококкоз (Alveococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепней Echinococcus multilocularis, с хроническим прогрессирующим течением, развитием в печени и других органах мн... перейти
» Эхинококкоз
Эхинококкоз
Эхинококкоз (Echinococcosis) - зоонозный биогельминтоз, вызываемый личиночной стадией цепня Echinococcus granulosus, характеризуемый хроническим течением и развитием преимущественно в печени, реже в л... перейти